GuruHealthInfo.com

Медицинско право: право, документи, отговорности, правила, актове.



здравно законодателство


UtverzhdenyGlavnym gosudarstvennymsanitarnym vrachomRossiyskoy федерация -Първо zamestitelemMinistra zdravoohraneniyaRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO9 януари 1998 godaData въведение - 08 юни, 1998 goda4.2. Методи за контрол. Биологично Микробиологична диагноза на дифтерия FAKTORYLABORATORNAYA INFEKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMU 4.2.698-981. Федералните служители проектиран справка - laboratoriidiagnostiki дифтерия infektsiiMoskovskogonauchno изследователски институт по епидемиология и микробиология im.G.N. Gabrichevskogo (MD Mazurova IK, MD Мелников k.b.n. Kombarova С., О. Борисова) и DepartamentomGossanepidnadzora руски Министерство на здравеопазването (Жилина NY 0.2). Одобрени и въведени в действие основен gosudarstvennymsanitarnym лекар на Руската федерация, на първия zamestitelemMinistra здравето на Руската федерация от 8 Април, 1998 Г.3. VvedenyvzamenMetodicheskihukazaniy4.2.589-96"Лабораторна диагностика на дифтерия инфекция"0.1. насоки Площ primeneniyaMetodicheskie изготвени за да помогне spetsialistambakteriologicheskih санитарни лаборатории - epidemiologichoskoysluzhby, здраве - институциите за социални грижи и научен институт за научни изследвания, за да се подобри laboratornoydiagnostiki дифтерия infektsii.2. Характеристики на причинителя на дифтерия infektsiiVozbuditelem difteriynoyinfektsiiyavlyayutsya toksigennyeCorynebacterium diphtheriae. Nontoxigenic Corynebacterium дифтерия difteriine причина инфекция. "етиологичната" etihmikroorganizmov значение при инфекциозни заболявания (фарингит, артрит, ендокардит и т.н.) изискват специално доказателство. Когато vydeleniinetoksigennyh щамове на В. diphtheriae от пациенти със съмнение nadifteriynuyu инфекция трябва да се обърне внимание на pravilnostprovedeniya бактериологично изследване и оценка на базата на способността toksigennyhsvoystv.V С. diphtheriae продукция ekzotoksinlezhit явление фаг (или лизогенен) превръщане. Konversiyanetoksigennyh щамове на В. diphtheriae в naoborotvosproizvoditsya генотоксични и само в специфични експериментални условия. В tehsluchayah когато по време на първоначалното посяване на материал изолиран генотоксични otbolnyh дифтерия, и при povtornyhobsledovaniyah след лечение с антибиотици - netoksigennyekorinebakterii дифтерия, може да се предположи, че когато ispolzovaniiantibiotikov предимно изчезне генотоксични щамове kakbolee чувствителни към действието им, и nontoxigenic shtammyprodolzhayut разпределени. Същата ситуация може да бъде създаден и prisanatsii антибиотици бактериални носители, и в същото време vydelyayuschihtoksigennye nontoxigenic Corynebacterium дифтерия. Откриване Утака медии в многократни изследвания само netoksigennyhshtammov не могат да се тълкуват като загуба на способността shtammovprodutsirovat ekzotoksin.Taksonomicheski близък изглед на С. diphtheriae са C.ulceransi C.pseudotuberculosis (C.ovis). Тези микроорганизми - prirodnyepatogeny говеда и малки говеда, коне. Otmechenasposobnost тези видове бактерии произвеждат токсин podobnyydifteriynomu. Има също така "nontoxigenic" щамове. разпределение Izvestnysluchai "токсикогенни" C.ulcerans в клиничната kartinezabolevaniya подобни на difteriey.Na орофарингеални лигавиците на носа и нормално chastovstrechaetsyalozhnodifteriynayapalochka Hoffmann (C.pseudodiphtheriticum). Способността да се изолират и identifitsirovatdannye бактерии служи като критерий за оценка на качеството на rabotybakteriologov interepidemic period.Vse микроорганизми от рода Corynebacterium yavlyayutsyagrampolozhitelnymi пръчки, които не образуват спори obladayuschimirazlichnoy степен на полиморфизъм. Повечето видове расте по-добре vaerobnyh usloviyah.Obychno колонии от микроорганизми от рода Corynebacterium naplotnyh хранителна среда (например, с кръвен агар) imeyutserovato - бяла или жълтеникава, непрозрачен ilipoluprozrachnye, кръгла форма, с диаметър от 1-3 мм. Най-често onibyvayut мека, маслен последователност, въпреки че някои видове rodakorinebakteriimogutobrazovyvat груб R-kolonii.Predstaviteli от този вид не са с висока fermentativnoyaktivnostyu. C.diphtheriae расте 37sh C, устойчиви на nizkoytemperature чувствителни към високи. Всички дезинфекция veschestvav обичайни концентрации (3-5%) korinebakteriidifterii унищожени в рамките на 20 - 30 минути. Генотоксични C.diphtheriae boleechuvstvitelny към антибиотици от nontoxigenic. Vozmozhnopoyavlenie антибиотик-резистентни щамове. Широко opredelyatchuvstvitelnostkantibiotikam изолати otbakterionositeley не трябва да се дължи на несъответствие rezultatovlaboratornoy проба на действието на антибиотици върху тялото на vozbuditelyadifterii cheloveka.Dlya C.diphtheriae характеризиращ значително полиморфизъм -raznoobrazie размер и форма клетка. Клетките имат формата на клубове, ракети и др еструс клетка посредничество напомня rimskietsifry X, V. Когато цвят често се среща vyrazhennayavnutrikletochnaya набраздяване, поради zerenvolyutina на присъствие. Описани афинитет volutin на метиленово синьо и тези priobrabotke боядисване на гранули или на ивици (клъстери на гранули) петно ​​сини на цвят, и в някои протоплазма sluchayahmozhet придобие rozovyyottenok.Ispolzovanievbakteriologicheskoy практика okraskipoGramuyavlyaetsyanetselesoobraznym, или дори poskolkukletkiC.diphtheriaelegkoobestsvechivayutsya spirtomimogutvyglyadetvmazkegramvariabelnymi gramotritsatelnymi.Dlya C.ulcerans и С .pseudodiphtheriticum sklonnostk характеризира с паралелно на клетките. 24 - 48 часа на културата etihvidov често са яйцевидна форма kletok.Po образуват колонии и някои биохимични svoystvamC.diphtheriae разделени на културно - biohimicheskievarianty - гравис, mitis, intermedius.Cherez 48 - 72 часа на вариант растеж mitis образува тип koloniiS - гладка, диаметър от 1 - 2 mm-вариант SR-gravisobychno изпъкнали колонии с повдигнат център с диаметър от 2 - 3 мм колонии изпълнение ШегтесНиз - S-тип, малки, плоска, гладка, разрушена диаметър ръб 0,5 - 1 mm. По-долу са описани само dvakulturalno - биохимичен изпълнение - гравис и mitis, така kakbiovar ШегтесНиз редки и биохимичен svoystvamne различава от биовар mitis.Na кръв telluritovyh медии след 48 часа на растеж koloniiC.diphtheriae изпълнение гравис, както и колония C.ulcerans, черно, матово имат радиални бразди. KoloniiC.pseudodiphtheriticum имат характеристика светлина obodok.V bakteriologicheskoypraktikeopiratsyatolko namorfologicheskie свойства колонии или микробни клетки priidentifikatsii C.diphtheriae, не е възможно. Opisanysluchai бактериологично хипо- и hyperdiagnostics (55% и 14.5%, съответно), когато се използват uchettolkomorfologicheskih знаци. При определянето C.diphtheriaeneobhodimo използване тест комплекс предимно патогенност (генотоксичност) основни priznakavozbuditelya difterii.Opredelenie генотоксични свойства проведени бактериолози първия ден на растежни съмнителни колонии върху плаки pervichnogoposeva материал. За да се избегнат грешки в coryneform бактерии определяне toksigennyhsvoystv, е необходимо да се проучи тази индикация umaksimalnogo брой колонии от плочите на първични техники за съответствие poseva.Pri описани по-долу могат да бъдат изучавани toksigennostbolee от 20 съмнителни колонии от един анализ. Nelzyaizuchat материал в множествено число растеж подозрителен koloniytolko 1-2 blyashkah.Fermentativnaya активност на микроорганизмите проучен putemopredeleniya tsistinazy ензим, уреаза, способността за разцепване dokisloty глюкоза, захароза, нишесте. В редки случаи, kogdaneobhodimo идентифицира C.ulcerans, добавя navosstanovlenie нитрат тест nitrity.Uchityvaya че когато difteriynoyinfektsii идентификация патоген водещ елемент е определянето на присъствието на токсин otsenkidrugihsvoystvimeet спомагателни znachenie.Ispolzovanie "дълго" въглехидрат е броят на съкратени priidentifikatsiya C.diphtheriae.Prakticheskimbakteriologam ангажирани в лабораторна диагностика на дифтерия, не trebuetsyaprovodit идентифициране на други видове микроорганизми rodaCorynebacterium. В същото време, в лабораторията, където причинени provoditsyadiagnostika заболявания "nedifteriynymi"Corynebacterium, недостатъчно използване дори "дълго"въглехидрат ред. За точни данни за идентификация mikroorganizmovneobhodimo използват chemotaxonomic методи на изследване, като откриване присъствието на миколова киселини, клетъчна стена на бактерии и някои vsostave drugie.Takim начин микроорганизъм е избран vozbuditelemdifterii ако има генотоксични свойства opredelennymspektrom ензимна активност (разцепване на глюкоза, нишесте, отсъствие на захароза разлагане ензим tsistinazy присъствието, отсъствието fermentaureazy) и характеристика морфологичен -kult uralnymi признаци (формиране на колония на черен или serogotsveta krovyano - telluritovyh среди пригодени, prineobhodimosti, клетъчна морфология - полиморфна които не са sporpalochki) .3. IssledovanieBakteriologicheskoe бактериологични изследвания са проведени за laboratornoydiagnostiki дифтерия инфекция, идентифициране на източниците на зараза за разпространението на токсикогенни inablyudeniya korinebakteriidifterii.VZYaTIE И ДОСТАВКА MATERIALA1. Успехът на бактериологично изследване в znachitelnoystepeni зависи от своевременното и точно улавяне на materiala.2. Като материал трябва изрично obuchennyemeditsinskie здравето на работниците - грижа uchrezhdeniy.3. В проучването да разгледа орофаринкса и дифтериен nos.Pri дифтерия редки локализации (око, ухо, рана, кожата, вагина) освен лезии трябва да вземат материал от smindalin nosa.4. Като материал се извършва чрез стерилни тампони vatnyhsuhih. За тяхното получаване, като се използва дървена ilimetallicheskie (от неръждаема стомана) пръти, един от kontsovkotoryh навити слой от абсорбираща памучна (primerno120 мг памучен тампон). Тампоните трябва да бъдат под формата "капки"И не"вретено", Тампоните са монтирани в епруветка с корк или vatnymiprobkami така че краят на тампона не докосва дъното и stenokprobirki. Стерилизира тампони в сушилня с горещ въздух при temperature140sh С за един час или чрез автоклавиране при 0.5 атм. 30 min.5. Материал от орофаринкса и назални тампони за вземане на индивидуални гладно или не по-рано от два часа след хранене, когато horoshemosveschenii, с помощта на шпатула, без докосване на тампон езикови ivnutrennih повърхности на бузите и зъбите. Един тампон sobirayutmaterial с лезии на орофаринкса - сливиците и prineobhodimosti - с арки на мекото небце, мъжец или фаринкса zadneystenki. В присъствието на плака, материалът трябва да се приема sgranitsy болно и здрава тъкан, леко натискане на nihtamponom. За като материал от носа използва друг тампон, който се въвежда първо в една и след това в другата ноздра, nekasayas snaruzhi.6 ноздри. Когато ларингоскопия материал (слуз филм) sobirayutneposredstvenno на ларинкса. Материал с лезии kozhisleduet събира сух тампон след отстраняване на кора или strupa.7. Тампоните са bytdostavleny в laboratoriyunepozdnee 3 часа след прием на материал. Когато provedeniiobsledovaniya контингенти в отдалечени райони bakteriologicheskihlaboratory, се препоръчва да се растителен материал на чаша spitatelnoy среда или използване на транспортната sredu.8. В случай на транспортна среда материал sobirayutsuhim тампона потопени в епруветката с околната среда и да се гарантира, че щепселът не е мокър тампон. Имайте предвид, че primenenietransportnoy среда се простира издаване окончателен otvetana един sutki.9. Купа (или епруветка с транспортна среда) с posevomissleduemogo материал може да бъде поставен за отглеждане vtermostat в 37sh С за 15 - 18 часа, след което доставят vlaboratoriyu.10. По време на транспортирането на дълги разстояния като тампони mozhnoispolzovat предварително накиснати rastvoromglitserina. Тампонът импрегнирана с 5 процента разтвор на глицерин vdistillirovannoy вода източена от стената на съда с разтвора, повишаване ин витро, както и сух тампон и автоклавира pri0,5 атм. 30 Min.11. Студената сезон тестов материал се доставя в торби vbaklaboratoriyu - термос, за да се предотврати zamerzaniya.12. Vsluchaeneobhodimosti на Corynebacterium дифтерия в postmortalnyhissledovany материал tselesoobraznobrat с сливица, ларинкса и носната кухина като в vnutrennihorganah redko.13 патоген засича. Всяка епруветка с изпитваното вещество (фаринкса, носа ilidrugaya локализация) е прикрепен към номера. Номерът на приложената тръба spiskeukazyvaetsya, фамилно име, собствено име (или инициали), възраст, име на институцията, водещия материал или домашен adresobsleduemogo, целта на проучването (с диагностичен ukazaniemdiagnoza, въз основа на епидемиологични показания, превантивна грижа), датата на вземане materiala.HOD изследвания. ПЪРВО DENPosev materiala.Material за изследване на орофаринкса, назално или drugihporazhennyh места отделно посяват върху повърхността на гъста хранителни среди izrekomenduemyh, излива се в чаши Petri.Posev от едната страна за производството на една чаша използване prietom половината от повърхността на семената среда izrotoglotki материал, и втори - за култури материал от носа. Когато posevemateriala от кожа или други места, добави още една чаша. НЕ допустимо материал реколта от няколко индивида на chashku.Pri засяване материал се втрива в среда от всички страни тампона nauchastke площ от 2 х 1 кв. см - образуването на такива "игрище"Това е задължително. След това същият този тампон инокулира ostavshuyusyapoverhnost 1/2 чаша. Засяването произвеждат често neperekryvayuschimisyashtrihami без отстраняване на тампона от повърхността на хранителната среда и неизменна позиция на тампона. Този метод позволява zaseyatves засяване материал с тампона за получаване на изолирани колонии (chistuyukulturu) за допълнително идентифициране на сеитба директно chashkepervichnogo че съкращава анализ odnisutki. Инокулираните пластини или тръби, съдържащи транспортна среда pomeschayutv термостат при 37sh С Засяване на транспортна среда за производство на наследяване ден плътна среда тампон ostenki натиснат тръби или примки, като материалът от osadka.Posev трябва да се извършва върху плаки със среда, температура или се загрява prikomnatnoy в инкубатор (15 - 20 минути) .VTOROY day1. Колонии, отглеждани на плочи 24 чрез сърфиране chasaposle засяване материал (ако материалът се поставят във втората polovinednya, гледане се извършва в точно 24часа, т.е. също втората половина на ден) или визуално, или използване стереоскопичен mikroskopabinokulyarnogo (MBS) 0.2. Чаши с колониите, като дифтерия, взети dlyadalneyshey идентифициране на културата във всички тестове. Mikroskopiipreparatov - тампони "подозрителен" Колонии могат да бъдат непроводящия. "подозрителен" колония krovyano - telluritovyhsredah след 24 часа светлина растеж - сив, изпъкнали, изравнени ръбове, в 48 часа - сив с метален оттенък, srovnymiili леко назъбени ръбове, раздробяване priprikosnovenii линия или мека консистенция. от "съмнителен"колонии са приготвени препарати - mazki.Kletki Corynebacterium дифтерия от култура отглеждани на sredahs инхибитори на растежа (калиев телурит, hinozol) могат bytukorocheny, сгъсти, но присъщата им местоположение и polimorfizmsohranyayutsya. Оценка на морфологични характеристики не pozvolyaetustanovit вида микроорганизъм, но daetvozmozhnost трябвало да го отведе до род korinebakteriy.Esli микроскопия показват коли характеристика rodakorinebaktery, тези колонии са избрани за dalneysheyidentifikatsii във всички тестове. В случай на други formmikroorganizmov (коки, мая, спори пръти), тези колонии dalneysheeizuchenie prekraschaetsya.3. В случай на растеж "подозрителен" подобни колонии трябва незабавно да продължат с изучаването на техните свойства генотоксични проучване svoystv.Toksigennye не по-малко от 2 izolirovannyhkolony чрез засаждане на едната половина на всяка от колонии на среда dlyaopredeleniya генотоксичност и неизпечена линия, - при Pisa среда и другата половина на колониите - в тръбата с скосен syvorotochnymagarom за запазване и натрупване на културата. Когато nevozmozhnostisnyat 1/2 колонии за засяване на генотоксичност и за среда Pizuispolzuetsya материал kolonii- цялата култура на agarisklyuchaetsya скосена и освен това от тръби култура използвани sproboy Pisa. Имайки предвид, че след 24 часа на нарастване на размера на колонии и материали imeyutnebolshie на 1/2 или 1 колонии могат bytnedostatochno за натрупване на дифтерия токсин в natoksigennost проба, и че в материала mogutnahoditsya едновременно генотоксични и nontoxigenic raznovidnostikorinebaktery дифтерия, е важно да се провери toksigennyesvoystva от възможно, при максимален брой колонии (над 20), смесване в продължение на 5 - 7, подобно на един blyashku.4 колонии. Ако не е възможно да се вземе проба за определяне toksigennostklassicheskim метод (вж. Стр 3), поради недостатъчна velichinykolony, тяхното проучване, смесване на същия тип колонии neskolkihblyashkah. Не гори през примката, посят в сряда Пиза. Чаши spervichnym засяване на изпитваното вещество се поставя отново vtermostat продължение на 24 часа и ги разглеждащи отново (от tretisutki) 0.5. Ако само една колония расте, то могат да бъдат засявани nasredu за определяне генотоксичност и без изгаряне на контур при stolbiksredy Пиза да се определи tsistinazy. Identifikatsiimozhno за по-нататъшно използване на тръбата за култура с пробата или с Pisa blyashkicherez 48 часа на растеж, или 24 часа на растеж на vyyavlennyhtoksigennyh kultury.6 свойства. За да се издаде предварителен отговор съмнителни колонии растеж sluchaemnozhestvennogo може proizvestiposev няколко колонии в течна среда dlyapostanovki Phragmites, Sachse попълване допълнителна проба (3 -5 подобни колонии се отглеждат след 30 минути инкубация.) И Pisa проба (5 - 6 подобни колонии отчитане чрез 3 часа на инкубиране). Priharakternoy за Corynebacterium дифтерия в MBS колония морфология, клетъчна морфология чрез микроскопия, Sachse отрицателна проба, проба положителни резултати Pisa, Phragmites може vydatpredvaritelny отговор на откриване на културата подозрителен nakorinebakterii дифтерия след 48 часа (на третия ден) с посяване momentapervichnogo изследва materiala.TRETY day1. След 24 часа, когато специфичен liniypretsipitatsii на среда за определяне генотоксичност, polozhitelnoyprobe на tsistinazu, изследвали култура идентифицирани kakkorinebaktery генотоксични дифтерия и извеждане dokumentirovannyyotvet.Pri липса на специфични преципитинови линии среда dlyaopredeleniya генотоксичност, плаките се инкубират за още 24 chasa.2. Културата нараства върху агар или серум sproby Pisa (след оценка на неговата чистота) се посяват в среда dlyaopredeleniya биохимичен изпълнение (захароза, глюкоза, скорбяла) ifermenta уреаза (урея хидролиза) 0.3. Плаките с първичен инокулирането issleduemogomaterialaprosmatrivayut визуално или чрез повторно MBS 36 -48 часа инкубиране в инкубатор. В присъствието на "подозрителен"Колониите изучават техните генотоксични свойства tsistinaznuyu активност ivydelyayut чиста култура на агар skoshennyysyvorotochny (cm. Втория ден от изследването, стр. 3) Ако не колонии предполагаеми korinebakteriidifterii, даде краен отговор, който Corynebacterium difteriine vyyavleny.Pri никакъв растеж на агар първоначалното посяване cherez48 часа инкубиране, в някои случаи изисква многократно като iissledovanie материал. Пълната липса на растеж често vsegosvidetelstvuetonarusheniipravilbakteriologicheskogoobsledovaniya (като доставка, посадъчен материал и kultivirovaniyaissleduemogo) .CHETVERTY ден (или пета) 1. Когато специфичните преципитинови линии на среда dlyaopredeleniya генотоксичност (след 24 часа инкубация пробите natoksigennost 48 часа растеж на първичния засяване) polozhitelnoyprobe до получаване tsistinazu документиран отговор vydeleniitoksigennyh difterii.2 Corynebacteria. Културата нараства върху агар или серум sproby Pisa, след определяне на чистотата му, се инокулира в средата dlyaizucheniya биохимични свойства (Хис среда със захароза, глюкоза, нишесте, Sachse проба с карбамид или бульон) 0.3. Отново (след 48 часа) да вземат предвид резултатите от natoksigennost на пробата, поставени по време на Ден 2 на проучването. Odnovremennoproizvodyat saccharolytic съхранение свойства и уреаза активност vprobah определени на три дни issledovaniya.Pri отсъствие на специфични преципитинови линии 48 проби chasovposle спиране на генотоксичност но polozhitelnyhrezultatah проби за tsistinazu, глюкоза, уреаза отрицателен rezultatahprob и захароза, култура идентифицирани kakkorinebakterii дифтерия nontoxigenic, което показва, biohimicheskogovarianta.Pri изолация на интоксикации, Corynebacterium difteriidopolnitelno даде отговор относно биохимичния МОРЕ tvah (ili96 72 часа след първоначалното посяване на материала) .BAKTERIOLOGICHESKOE ZAKLYUCHENIE1. Наличието на специфични преципитинови линии с opredeleniitoksigennyhsvoystv, положителен тест за tsistinazu, отрицателен тест за уреаза, култура ibiohimicheskie характерни свойства (захароза, глюкоза, скорбяла) pozvolyayutzaklyuchit, която се отнася до изолирани култури korinebakteriydifterii предвид генотоксични, биохимични или mitis.2 изпълнение гравис. Липсата на специфични преципитинови линии с opredeleniitoksigennyhsvoystv, положителен тест за tsistinazu, отрицателен тест за уреаза, култура ibiohimichekie характерни свойства позволяват да се заключи, че изолиран kulturaotnositsya за видовете Corynebacterium дифтерия, nontoxigenic, биохимични или mitis.3 изпълнение гравис. В присъствието на преципитинови линии идентичен контрол spetsificheskimliniyam щам Corynebacterium дифтерия, polozhitelnyhprob уреаза, tsistinazu, глюкоза и нишесте ферментация, липса на захароза ферментация vnitrity не намаляване на нитрати, културата принадлежи ultserans на coryneform против генотоксични variant.Pri не преципитинови линии при определяне toksigennyhsvoystv и сте всички други функции, характерни dlyakorinebaktery ultserans на, nontoxigenic опция ibakteriologichesky отговор се считат за отрицателни ym.4. Когато изберете Corynebacterium Gofmanailidrugihdifteroidov, бактериологични отговор otritsatelnym.5 вярвам. В някои случаи, когато диагностичен преглед и poepidpokazaniyam, може да се даде предварителен отговор. Etotrebuet създаване на допълнителни проби, наличие на kachestvennyhpitatelnyh среди, за изпитване - системи за производство и Phragmites spetsialnoobuchennogo персонала. Временен отговор могат да се издават множество растежни подобни prinalichii "подозрителен" koloniyna първоначалното посяване ястия след 24 часа на инкубиране (вж. vtoroyden проучвания, п. 6) .Predvaritelny отговор може да се променя след okonchaniyabakteriologicheskogo issledovaniya.6. Щамовете на Corynebacterium дифтерия atipichnymimorfologicheskimi, биохимични, свойства интоксикации, Corynebacterium ishtammy ultserans трябва да бъдат адресирани до federalnuyureferens - лаборатория за диагностика на дифтерия инфекция priMoskovskom изследователски институт по епидемиология и микробиология im.G.N. Gabrichevskogo за по-нататъшно проучване (125 212 Ul адмирал Макаров, 10). Схема БАКТЕРИОЛОГИЧНИ проучвания1 denPosev issleduemogomateriala на selektivnuyudifferentsialno - диагностичен или, ако е необходимо, vtransportnuyu среда. Инкубиране в инкубатор при 37sh В.2 дни (24 часа) 1. колониите на изследването, ако е възможно - на postanovkaproby генотоксичност, tsistinazu и сеитба култура skoshennyysyvorotochny agar.2. При използване на транспортната среда трябва да се proizvestiperesev на селективен диференциално - диагностичен sredu.3. Когато множество растеж, ако е необходимо, mozhnoprovesti проучвания за издаване на предварителен отговор -Допълнителна опитат Пиза, Sachse и култура "подозрителен" koloniyv течна среда за откриване на дифтерия токсин vRNGA.3 дни (48 часа) 1. Анализ на рентабилността на проби за генотоксичност и tsistinazu, разположени на втория ден от изследването. Ако nalichiyaspetsificheskih валежите линии и положителна проба Pizuvydayutdokumentirovannyyotvet разпределение toksigennyhkorinebaktery difterii.2. Засяване чиста култура избран втори denissledovaniya, Хис в средата за изследване на биохимичните свойства (захароза, глюкоза, нишесте, карбамид) .3. Равносметка (48 часа) първичен posevavizualno чаши или използване на MBS. тестове се задържа за генотоксичност, tsistinazu и скрининг на колонии върху серум agar.4 скосени. В случай на транспортната среда, разбира се issledovaniyasm на. като се излиза от п. 1 на втория ден и след това при skheme.5. Vydachabakteriologicheskogootvetaobotsutstviikorinebaktery difterii.6. При определяне RNGA за откриване на дифтерия токсин prinalichii положителен резултат в тази реакция и откриване uissleduemoy култура tsistinazy ензим отсъствие fermentaureazy може да даде предварителен отговор разпределят vozbuditelyadifterii.4 дни (72 часа) 1. Отчитане на култура от генотоксични свойства, избрани в denissledovaniya 3 (след 48 часа на растежа на първичния засяване), и реакцията на разпределение vydachadokumentirovannogo генотоксични korinebakteriydifterii. Засяване култури избрани за определяне biohimicheskihsvoystv (захароза, глюкоза, нишесте, карбамид) 0.2. Счетоводен култура биохимични свойства (генотоксични ilinetoksigennoy) разпределени на втория ден от изследването (cherez24 часа инкубиране първоначалното засяване) .Vydacha бактериологично отговор netoksigennyhkorinebaktery разпределение дифтерия показва idopolnitelnogo въплъщение биохимичен отговор на биохимичните свойства на дифтерия toksigennyhkorinebaktery разпределени ranee.5 дни (96 часа) Издаване на разпределение бактериологично отговор (48 chasovinkubatsii първоначалното засяване) или генотоксични netoksigennyhkorinebaktery дифтерия Y Азан биохимична varianta.4. Методи за определяне на патогени difteriynoyinfektsiiOPREDELENIE генотоксични KORINEBAKTERIYDIFTERII PROPERTIES посредством реакция утаяване в метод гел на базата за определяне генотоксичност korinebakteriydifterii (Elek тест) се намира процес immunodiffuziitoksina брояч и антитоксични антитела в гъста хранителна среда. Вместо оптималното количествено съответствието между токсин, произведен от Corynebacterium, и антитоксин nafiltrovalnuyu хартия с покритие е тяхното взаимодействие с obrazovaniempretsipitata като бяло линия или "мустак".Toksigennost Corynebacterium дифтерия определя, обикновено в чиста култура (или култура на отделни колонии с skoshennogoagara, или проба Pisa). колонии на сместа или култури zagryaznennyepostoronneymikrofloroy могат също да бъдат тествани natoksigennost. При липса, в този случай, гелът се утаява vagarovom опит се повтаря с специални chistymikulturami.Dlya продукции проби за генотоксичност трябва да има: стерилна петриева паничка с плоско дъно, хранителна среда - agarMartena или суха среда търговски хранителен normalnuyusyvorotku говеда кръв, стерилна izfiltrovalnoy хартиени ленти с размери 1,5 см х 8 см, ochischennyyfermentolizom специфичен сорбция и дифтериен антидот (vdalneyshem по антитоксин) protivodifteriynuyuantitoksichesk та конски серум, терапевтично (в dalneyshemimenuetsya антитоксично серум), или завърши хартия diskis антитоксин прилага към тях, и - kontrolnyytoksigenny Corynebacterium дифтерия щам 24 - 48 часа rosta.Prigotovlenie чаши за определяне probyna toksigennostPitatelny агар за определяне генотоксичност tselesoobraznorazlivat тръби 10 мл (количество, необходимо dlyaprigotovleniya една чаша). При голямо количество на работа pitatelnyyagar дозира във флакони в 70 - 80 мл (7 - 8 на пробата чаши natoksigennost). Хранителен агар трябва rasplavlivat tolko1 множество различни топене влошава качествата на средата. Pitatelnyyagar rasplavlivayut във водна баня при 90SH С, веднага izbani отстранява, охлажда се до 50sh С и се добавя говеда 20% серум krupnogorogatogo. По този начин, 10 мл хранителен агар се прибавят 2 mlsyvorotki говеда, разбърква се и се излива асептично в стерилна петриева паничка, на дъното raspredelyayutsosedu внимателно chashki.V въртене център на чашата към повърхността на obozhzhennympintsetom на втвърдяване агар поставя лента от филтърна хартия propitannuyuantitoksinom ( или антитоксично серум) .Chashku суши в пещ при 37sh с за 15 -20 минути., превръщайки го с главата надолу. При използване bumazhnyhindikatornyh задвижва хранителен агар плака се суши donaneseniya sredy.Chashki дискове върху повърхността на средата за определяне генотоксичност магазин nerekomenduetsya.Prigotovlenie хартия polosokPoloski филтърна хартия се нарязва на площ от 1,5 см х 8 см, обвит с 2 - 4 парчета в торбичка и се стерилизира в avtoklavepri 0.5 атм в продължение на 30 минути. Чанти с хартия poloskamihranyat в стерилна петриева паничка 3 nedel.Pered спиране проби за съдържание генотоксичност santitoksinom на флакона се разтварят в 1 мл стерилен fiziologicheskogorastvora, се прехвърля в стерилна епруветка и показват neydannye етикети (разтворен антитоксин temperature4 съхранява при - 6sh С не повече от 10 дни) , Филтърна хартия obozhzhennympintsetom поставя в стерилна петриева паничка. На всеки poloskunanosyat антитоксин 0.25 мл, съдържащи 500 ME в 1 мл. Dlyaudaleniya излишък серум навлажнена лента прилага ksterilnoy чаша капак Petri.Pri използване антитоксично серум (vmestoantitoksina) изисква разреждане до 500 ME 1 ml.Razvedenie антитоксично syvorotkiSoblyudaya асептична техника, антитоксични perenosyatiz серумни ампули в стерилна епруветка. На тръбата посочи dannyeetiketki и срок на годност. Съхранявайте серум при 4 -6sh C.Syvorotka трябва да се разреди със стерилни съдържание fiziologicheskimrastvorom до 500 ME в 1 мл. Търговско препарат mozhetimet различна активност (5000 ME, 10000 ME, 20000 МЕ) и razlichnyyobem.Naprimer в ампула съдържа 10 000 ME (в обем от 4.8 мл, kakukazano кутия етикет с ампули) антитоксично syvorotki.Dlya опростяване на изчисленията, общото количество на серум може да бъде отнеме za5 мл. Следователно, в 1 мл серум, съдържащи 2000 ME (10000 МЕ: 5 = 2000 ME). За да се получи 500 ME в 1 мл sleduet1 мл серум се разрежда 4-кратно, т.е. до 1 мл серум dobavit3 мл стерилен физиологичен разтвор. Когато neobhodimostimozhno разреден серум на по-малки обеми: 0.1 мл syvorotkidobavit до 0,3 мл физиологичен разтвор или 0.2 мл syvorotkidobavit 0,6 мл физиологичен разтвор или 0.3 мл syvorotkidobavit 0,9 мл физиологичен разтвор и т. d.Razvedenie серум може да се направи по друг начин. Ако, например, съдържащи се в ампула 5000 ME серум в обем от 2.5 мл, МЕ 500 се съдържа в 0.25 мл серум. Към този обем dobavlyayut0,75 мл стерилен физиологичен разтвор и серум poluchayutrazvedenie 500 ME 1 ml.Razvedennuyu серум може да се съхранява в продължение на 7 дни при temperature4 - 6sh C.POSTANOVKA PROBYKulturu посяват в "плакети" диаметър 0.6 - 0.7 cm narasstoyanii 0.7 - 0.8 cm от друг и 0,5 см от хартия ръб poloskifiltrovalnoy. Една чаша трябва да се засаждат не повече от 10 "плакети", От тях 6 "плакети" тест култура 4 -kontrolnogo щам. Когато малко количество инокулира ispytuemogomateriala 6 контрол "плакети" и 4 - субектите (Фигура 1. *>). Чаши с посев се поставят в термостат при 37sh С .-------------------------------- *> Не privoditsya.Uchet rezultatovRezultat отчита при 18-24 и 48 часа rosta.Sleduet се разбират chtopreparatantitoksicheskoyprotivodifteriynoy серум, в допълнение към difteriynomuantitoksinu антитела съдържа антитела срещу антигени в състава на микробна проба kletki.Poetomu за генотоксичност ispolzovaniemdannogo с наркотици утайки може да се образува не само vrezultate свързване на токсина с антитоксин (spetsificheskiepretsipitaty), но също така при взаимодействието на антибактериални антитела skomponentami Corynebacteria клетки г ifterii (nespetsificheskiepretsipitaty). Последното може да бъде оформен като генотоксични, погрешно броя и контролния щам, и netoksigennyhkorinebaktery дифтерия. Понякога има облика на mnozhestvennyhliny валежи. Неспецифичните преципитати обикновено леки, са неясни очертания показват най-48 -72 часа, в редки случаи може да се появи в началото sutki.Kriteriem оцени специфичността на сливането на утайки е liniypretsipitatsii тест щам със специфичен liniyamikontrolnogo генотоксични щам. В случаите, когато ukontrolnogo щам образувани няколко линии на валежите, специфичен трябва да се обмисли по-точна и началото poyavlyayuschiesyapretsipitaty. Ето защо, гледане на примерните чашките на toksigennostosuschestvlyayut след 18 - 24 часа от момента на неговото производство. Ако vtechenie този път от щам pretsipitatsiine линия контрол са открити, че представлява нарушение на usloviypostanovki reaktsii.Varianty оцени отговора на резултатите: 1. тест култура Corynebacterium дифтерия yavlyayutsyatoksigennymi, ако те образуват утаяване линии се сливат iliimeyut тенденция да се слее с съответния контрол spetsificheskimiliniyami генотоксични shtamma.2. тест култура Corynebacterium дифтерия yavlyayutsyanetoksigennymi, ако: а) на линията на утаяване образува тест култура, при липсата на наличието на специфични линии утаяване ukontrolnogo щам б) линия на утаяване не може да се слее с spetsificheskimiliniyami контрол утаяване щам и пресича или imeyuttendentsiyu кръстосване с тях (неидентични , nespetsificheskielinii) -с) линия утаечна тест култура snespetsificheskimi линии се сливат контрол щам-д) утаяване тестовата линия култ URS sospetsificheskimi линии се пресичат и се сливат с неспецифично liniyamikontrolnogo shtamma.Ochischenny ензимна хидролиза и специфичен сорбция антитоксин Не съдържа антитела към компонентите на микробни клетки. Когато ispolzovaniietogo подготовка неспецифични преципитинови линии не obrazuyutsya.METODIKA генотоксични SVOYSTVKORINEBAKTERY ОПРЕДЕЛЯНЕ С ДИФТЕРИЯ INDIKATORNYHBUMAZHNYH диск с ANTITOKSINOMNa петриево блюдо повърхност с носител за микробен поставени opredeleniyatoksigennosti дифтерия индикаторни колела sdifteriynym антитоксин. Около всеки диск 5 antitoksinomformiruyut "плакети": две "плакети" - щам контрол и три -ispytuemye (един анализ най-малко две подозрителен koloniyamiformiruyut "плакети" от изолирани колонии и -от смес от 3 - 6 koloniy- подобни картини от същия analizamozhno се проведе по друг диск антитоксин). Всичките пет"плакети" са разположени симетрично около диска на разстояние 0,8 smot му ръб. Диаметърът на всеки "плакети" 0,8 см. На една чаша Petrimozhno да се настанят до четири диска Антитоксичните и съответно 20 "плакети" култури. Чаши с posevamipomeschayut в термостат при 37sh C.Rezultat реакция четат на 18 - 24 часа и 48 часа чрез потвърждаване. Наличието на утаяване линии между santitoksinom на диска и изпитването култура показва eetoksigennosti. Изследването счита токсичен култура, утаяване тази култура esliliniya преминава под ъгъл linieypretsipitatsii контрол щам. Липсата на утаяване линии uispytuemyh култури след 48 часа, ако те имат kontrolnyhshtammov показва не генотоксичност имат izuchaemyhkultur. утаечна линия в контролни щамове dolzhnypoyavlyatsya след 18 - 24 часа. късно вид liniypretsipitatsii на изисква проверка хранителен контрол на качеството среда ilizameny shtamma.Hranenie контрол щам в laboratoriiDlya контрол на съхранението щам в лаборатория mozhnoispolzovat полутвърда агар серум получен nabulone Мартин или друг хранителен бульон (рН 7,6). Дръжте vholodilnike презасаждане веднъж на всеки 2 - 3 месеца. Полутечни agarrazlivayut 8 мл тръби и 1 мл говежди syvorotkikrupnogo skota.Kontrolny toksigennyyshtammkorinebaktery дифтерия изпълнение гравис, получен в Държавния изследователски институт по стандартизация ikontrolya медицински и биологична preparatovim.L.A. Tarasevich. В процеса на генотоксичност не може да се използва vkachestve контрол, производство щам PW-8 и е необходимо периодично да varianty.Kontrolny щам пренесен на krovyanomagare. За успешно идентифициране на Corynebacteria difteriikontrolny генотоксични щам субкултивират всеки с 1 - 2 sutok.METODIKI ОПРЕДЕЛЕНИЯ PRIZNAKOVOPREDELENIE TSISTINAZNOY биохимична активност (проба Pisa) Corynebacterium дифтерия и Corynebacteria ultserans, unlikefrom lozhnodifteriynoy Hoffmann и други пръти korineformnyhbaktery притежават ензим tsistinazoy.Ispytuemuyu култура инокулира линия "убождане" . В pitatelnuyusredu за определяне tsistinazy, излива се в тесен височина probirkistolbikom на 3 см от хранителна среда състав има цистин оцетна - киселина олово. През produtsiruettsistinazu на растеж на културата, разцепване tsistin- и оформен в etomserovodorod взаимодейства с оцетен - киселина олово, сяра в kotoryyprevraschaetsya - олово киселина - съединение-кафяв тъмен цвят. Corynebacterium дифтерия и korinebakteriyultserans не само причиняват потъмняването на средата по време на инжектирането, но iobrazuyut тъмен облак около него - кафяв narasstoyanii около 1 см от средна повърхност. Reaktsiiuchityvayut води след 24 часа. В присъствието на множествена dlyapolucheniya растеж се ускори отговор (над 3 часа), културата размера на среда inokuliruyutbolshim. Едновременно ispytuemymikulturami, посяване се извършва в контролния щам otdelnuyuprobirku.OPREDELENIE уреаза AKTIVNOSTILozhnodifteriynye Hoffmann коли, Corynebacterium ultserans inekotorye други микроорганизми от рода Corynebacterium да произвеждат obladayutsposobnostyu време на растежа irasscheplyat ензим уреаза карбамид. Corynebacterium дифтерия такава способност neobladayut.Probu уреаза могат да бъдат поставени в два варианта - от metoduZakse (а) и чрез поставяне на бульон с карбамид (б) .a) За метод уреаза Sachse импровизиран smeshivayut1 част от Реактив А и 19 части реагент на В. сместа се излива в 0,1 мл uzkieprobirki едно контур и тества чист kulturyso агар тръби или с Pisa среда. За vydachiuskorennogo отговор в присъствието на множествена растеж върху плочата odnotipnyhkolony първоначалното посяване, колонии право vnesenieneskolkih една проба тръба уреаза. Rezultatuchityvayut след инкубиране в инкубатор при 37sh С за 30 min.b) чиста култура от Corynebacterium дифтерия в smochevinoy инокулира бульон, излива се в епруветки с 2 - 3 мл, и се поставя в инкубатор, в резултат на 24 часа инкубация при 37sh C.Ferment уреаза разцепва iuglekisloty урея да се образува амоняк. Това увеличава рН на средата и се появява izmenenietsveta индикатор (зачервяване). При липсата на този ензим issleduemoykultury, средно не оцветяване proiskhodit.Rekomenduetsya едновременно в отделна тръба, zasevatkontrolny shtamm.OPREDELENIE saccharolytic AKTIVNOSTIDlya идентификация Corynebacterium дифтерия takzheotsenku използва saccharolytic активност на изолираните култури за sredahGissa въглехидрати - захароза, глюкоза, разтворим тръба krahmalom.Kazhduyu със среда Хис се инокулира с 1 контур chistoykultury. Резултатът на 24 часа и при otritsatelnomkrahmalnom знак - се образува киселина, има възстановяване обезцветява фуксин и sredapriobretaet пурпурен цвят след 48 часа на културата култури vtermostate в 37sh C.Pri ферментация на въглехидрати. Препоръчителна stavitprobu едновременно с контролния щам Corynebacterium дифтерия variantagravis.OPREDELENIE нитрат редуктаза AKTIVNOSTISposobnost Corynebacterium дифтерия възстановяване soliazotnoy киселина (нитрат) в соли азотиста киселина (нитрити) е допълнителна функция, която позволява differentsirovatkorinebaktery ultserans.Proizvodyat култура семена при изследване в епруветка с nitratnymbulonom, инкубират се в продължение на 24 часа в 37sh C.Zatem прибавя 2 - 3 капки реагент на нитрит (Griess iliKasatkina ). Ако е имало образуването на нитрити, sredaokrashivaetsya червено. Ако не obladaetnitratreduktazoy микроорганизъм, средно не обезцветяване proiskhodit.Odnovremenno с епруветки, инкубират kontrolnuyuprobirku стерилен sredoy.5. SredyKachestvo питателна медийна култура е от съществено значение, когато lyubombakteriologicheskom проучване. За да се постигне maksimalnoyvysevaemosti Corynebacterium дифтерия на изпитвания материал, трябва да се създадат оптимални условия за растеж, възпроизводство etihbaktery запазване на техните биологични свойства, както и придружаващите dlyaingibirovaniya растеж микрофлора. Тя dostigaetsyaputem използват универсални хранителни бази с dobavleniemkrovi и калиев телурит. Калиев телурит в opredelennoykontsentratsii не инхибира растежа на представители rodakorinebaktery и почти напълно инхибира растежната среда са postoronneymikroflory.Krovyanyetelluritovye takzhedifferentsialno - диагностика като koloniikorinebaktery на тези среди имат сив или черен цвят (тези микроорганизми са способни да възстановят калиев телурит dometallicheskogo телур черно вещество, и акумулиране egovnutri клетки) .NPO "Захранващи среди", Махачкала suhuyuhinozolnuyu произвежда диференциално - диагностичен сряда Buchina dlyavydeleniya Corynebacterium дифтерия, който се получава чрез naetiketke на предписание, допълнена с 5% кръв (не dobavleniesyvorotki вместо кръв). Buchina сряда ниско krovyanymtelluritovym сряда за инхибиторна активност и koloniivozbuditelya дифтерия могат да се появят един ден по-късно от nakrovyanyh telluritovyh среди. През последните години, prikladnoymikrobiologii на Research Institute (.. N Obolensk Москва област) произвежда pitatelnuyusredu за изолиране Corynebacterium дифтерия - korinebakagar.Odnako, в сравнение с кръв telluritovymi среда dannoysrede да растат в 2 - 3 пъти по-малки колонии korinebakteriydifterii.Uchityvaya-горе, все още, pitatelnymisredami най-доброто за първична ваксинация материал са krovyanyetelluritovye среда. Като основа за тези среди mozhnoispolzovat сух хранителен агар (SPA) НСО"Захранващи среди" (Махачкала) на хранителен агар osnovepankreaticheskogo хидролизат, рибно брашно (RM) производство GNIIPM (н. Obolensk). Хранителен агар се приготвя чрез етикета на предписание iextempore добавя кръв и телурит kaliya.Dlya определяне генотоксични свойства коринебактерии difteriivypuskaetsya търговски суха сряда OTDM (НПО "Pitatelnyesredy"..., Махачкала) и GNIIPM (п Obolensk Московска област) медийни данни, изготвени от etiketke.Luchshey предписването на основата на подготовката на проби от околната среда и за opredeleniyatoksigennosti Пиза остава отворен огнище пептон, kotoryygotovitsya в лаборатория или в департаментите на хранителна srednekotoryh научно - изследователска институции за prigotovleniyaMartenovskogo agara.Dlya отпадналите колонии и култивиране Corynebacterium условия дифтерия vlaboratornyh подготвят серум агар sredu.Primenenie серум е сгънат netseleso braznym.Kazhdaya нова серия от културална среда (както търговски iprigotovlennoy ин витро) podlezhitbakteriologicheskomu контрол. В случаите, когато хранителна среда rostovyesvoystva не отговарят predyavlyaemymtrebovaniyam, хранителен агар бази получава бульон -suhoy хранителен бульон (SPB), произведен от НСО "Pitatelnyesredy" (Махачкала), време-bulonproizvodstvaGNIIPM (п Obolensk.) - бульон aminopeptide за микробиологични tseleyproizvodstva кланици (град Петербург, Armavir, Stavropol ') и бульон, получен в лабораторията (Hottinger смилане, 1% пептон вода, aminnogoazota на съдържание 150 -. 180 мг /%) среди за първоначалното посяване слой chashkamPetri изсипва в 3-4 мм. Те могат да бъдат използвани в techenie3 дни, когато се съхранява при Получаване температура 4sh C.METODY И хранителна среда REAKTIVOVTRANSPORTNAYA носител (носители НАТРУПВАНЕ) като основа за получаването на транспорт sredyispolzuyut 0.1% агар хранителен на Hottinger смилане или 0.1% агар търговски бульон хранителни вещества, рН 7,6.0,1% база агар се излива в епруветки в 4 мл sterilizuyutv автоклав при 1 атмосфера в продължение на 20 минути. време на съхранение - до 1 месец при 4sh В. Преди употреба, всяка епруветка ssoblyudeniem асептична техника, се прибавя 0,5 - 1,0 мл говеда syvorotkikrupnogo и 0.05 мл (1 капка) 2% калиев rastvoratellurita. Селективно контролира среда на стерилност поддържане на 37sh С в продължение на 48 часа. Срок на годност gotovoysredy - 10 дни при 4sh C.ZHIDKAYA хранителна среда за отчета за цел RNGAS дифтериен токсин индикация RNGA материал chashkipervichnogo посев инокулира в епруветка с течна среда syvorotochnoypitatelnoy получава въз бульон Martin, ssoderzhaniem амин азот на: 150 - 180 мг /% рН 7,6. Pitatelnyybulon излива в епруветки в 3.5 мл, стерилизира чрез автоклавиране pri1 атм. за 20 минути. срок на годност - до 1 месец. в temperature4sh C.Pered потребление на всяка епруветка с отношение pravilaseptiki прибавя 0,5 мл говежди серумен i0,05 мл (1 капка) 2% разтвор на калиев телурит. Kontroliruyutna стерилна среда и се съхранява по същия начин, както за първична полутечен transportnuyusredu.SREDY посяване изпитвания MATERIALASreda Clauberg IIK 100 мл стерилни бази хранителен агар (рН 7,6), стопени и се охлажда до 50sh С, glitserinovoysmesi 10 мл, 50 мл "лак" Кръв и 3 мл 2% -ен разтвор на телурит kaliya.Prinimaya оценено, че хранителната среда и razvoditsyaglitserinovoy на смес "лак" кръв в 1.6 пъти дадена среда priprigotovlenii трябва да увеличат претеглят suhogopitatelnogo агар изчисление 1.6 raza.Primer. Етикетът върху флакона със сух kommercheskimpitatelnym агар съдържа претегля необходимо за prigotovleniyaodnogo литър среда D. За пример 30 Получаване 1 litrapitatelnoy основа за Clauberg II среда трябва да се navesku48 г (т.е. 30 грама х 1,6 = четиредесет и осем грам) .За глицерин хранителен смес на 40 мл кръв или defibrinirovannoykrovi смес се прибавя 20 мл химически chistogosterilnogo глицерин (глицерол стерилизира при температура 110sh ул Savanoriu в продължение на 30 мин.). за получаването на "лак" Кръв sterilnoydistillirovannoy до 34 мл вода се прибавя 16 мл дефибринирана krovi.KROVYaNOY TELLURITOVY агар (АКТА) Към 100 мл стерилни бази хранителен агар (рН 7,6), се топи и се охлажда до 50sh С, се прибавя 7 мл 10 mldefibrinirovannoy или хемолизирани кръв и 2ml 2% разтвор на калиев телурит. Вместо това, кръвта може да се използва suhuyutelluritovuyu смес (11 мл на 100 мл среда), като в 100 mlKTA импровизиран прибавя 1 мл 2% -ен разтвор на калиев телурит, t.k.1 мл 2% разтвор вече се съдържат в кръвта telluritovoysmesi 11 мл. Като се има предвид, че хранителна среда razvoditsyakrovyu около 1,1 пъти, в подготовката на средно претеглена sleduetuvelichit хранителен агар изчисление суха 1.1 raza.Primer. Етикетът върху флакона със сух kommercheskimpitatelnym агар съдържа претегля необходимо за prigotovleniyaodnogo литър среда, например, 30 F. За получаването на 1 litrapitatelnoy основа за CTA трябва да вземе проба от 33 г (т.е. 30 гр x1,1 = 33 грам) .METODIKA ПОДГОТОВКА KROVYANYHI KROVYANO - TELLURITOVYH SMESEYDlya получаване на хранителна среда добрите ispolzovatdefibrikirovannuyu кръвта на животни - едър рогат добитък, коне, свине, овце, зайци. Кръвта се събира в sterilnyesosudy с мъниста с помощта на специално монтиран система асептично. В някои случаи, кръвта се събира, nemontiruya специални системи, сливане на първата кръвно брашно vnebutyli.Mozhno използването на човешка кръв е изтекла (цитрат и консерванти) получаване от тях spetsialnyekrovyanye смес. За това е необходимо да се отстрани течността chastotstoyavsheysya кръвта, съдържащ натриев цитрат и консерванти. Kostan еритроцитна маса в съда добавят sterilnyyfiziologichesky разтвор, който може също така да се отстранят posleosedaniya еритроцити, и се добавя дестилирана вода dopervonachalnogo obema.Horoshim syremdlyapolucheniya кръв смес sluzhiteritrotsitarnaya маса, която може да остане при proizvodstvegammaglobulina и други кръвни продукти. Към еритроцитите massedobavlyayut стерилна дестилирана вода в размер на 1/3 obemaeritrotsitarnoy massy.Mozhno използвате останалите posleserologicheskih реакции (с отрицателен резултат на реакцията) на кръвни съсиреци, съсиреци или abortnoy плацентарна кръв. Vsterilnye съсиреци събират бутилки със стъклени мъниста и счупено стъкло, а след това се замразяват и размразяват, а след това се съсирва лесно razbivayutsyabusami. Тази процедура може да се повтаря 2 - 3 пъти. След dobavlyayutsterilnuyu дестилирана вода в размер на 1/4 от смеси обем кръв sgustkov.V получени по горния метод, калиев телурит се прибавя като консервант. За всеки 10 mlkrovyanoy смес се прибавя 1 мл 2% разтвор на калиев телурит. Takuyukrovyano - telluritovuyu смес може да се съхранява при 4sh С изчисление w2 mesyatsev.Primer. Освен супернатантата цитратна кръв obemom250 мл 50 е отстранен - ​​60 мл на течната част, след това neobhodimodobavit същия брой - 50 - 60 мл sterilnogofiziologicheskogo разтвор, разбърква се отново се оставя да престои, след отстраняване на 50 - 60 мл на течната част и до 50 - 60 mlsterilnoy дестилирана вода. По този начин, тя ще polucheno250 мл кръв смес. Това е необходимо за запазване dobavit25 мл 2% калиев телурит (за всеки 10 мл кръв smesipribavlyayut 1 мл 2% калиев телурит) .В нататък в получаването на кръв telluritovoy sredyna всеки 100 мл хранителен агар се прибавя 11 мл krovyanoytelluritovoy смес (10 мл смес на кръв и 1 мл rastvoratellurita 2% калий). Импровизиран в такава среда допълнително се прибавя 1 мл 2% разтвор kaliya.Prigotovlenie телурит разтвор телурит kaliyaDlya telluritovyh медии използват готови kommercheskiy2% разтвор телурит kaliya.Pri отсъствие на търговски достъпен телурит разтвор kaliyagotovyat следва: 100 мл дестилирана vodyrastvoryayut 2 грама кристален калиев телурит. За sterilizatsiirastvor загрява в кипяща водна баня в продължение на 30 минути. и задържане pritemperature 4shC. Кристална калиев телурит hranyatgermeticheski затворен банка тъмно stekla.SYVOROTOChNY AGARSyvorotochny агар се използва за скрининг на колонии ikultivirovaniya Corynebacterium дифтерия, могат да бъдат получени Любовта Достатъчно на по-горе хранителни вещества osnov.K 100 мл разтопен и се охлажда до температура 50sh Cpitatelnogo агар (рН 7,6) стерилни 10 мл syvorotkikrupnogo говеда. Средата се разбърква, излива vsterilnye тръби на 4 - 5 мл, и ги постави naklonnompolozhenii за наклон всяка партида kotorogoproveryaetsya стерилност. Няколко тръби се поставят в термостат нощ. В случая на среда за покълване се отхвърля всички скосената partiya.Probirki серум агар съхранява при 4sh С w2 nedel.MARTENOVSKY агар VODOYDVOYNOY KONTsENTRATsIIMartenovsky месо пептон - 0,5 л, месо вода - 0,5 л, агар -agar - петнайсетгр оцетна - натриев киселина - 5 г, малтоза - 3 g.15 г агар промива през protochnoyvodoprovodnoy работен ден във вода, изцежда и внимателно се прехвърля в 1 lmartenovskogo бульон (0.5 л огнище пептон и 0.5 л myasnoyvody). Коригирана рН 7.8 - 8.0 чрез алкализиране bulona20% разтвор на NaOH при хартия с крезол червен индикатор, който в тази реакция променя цвета си в жълт розов -malinovy. Хранителната среда се нагрява под обратен хладник в продължение на 10 минути. след 0.5% (5 г на 1 л) оцетна - киселина натрий, 0.3% малтоза (3 г на 1 л), рН се проверява и ако е необходимо, се довежда отново до 7.8 - 8.0, нагрява . vtechenie 15 минути, оставя се да престои на топло (в превозното средство Koch термостат) на 2 - 3 часа и се филтрира през памучен плат или -marlevy филтър. Разпределя в стерилни флакони (70 - 80 мл) pribolshom натоварване или тръби (10 мл) и sterilizuyutodnokratno тече пара в продължение на 30 min.Martenovsky peptonSvinye стомаси, за предпочитане сдвоени с еластични стени, големи количества от слуз и простудни симптоми без пречиства otzhira (стомаси напоена жлъчна изхвърля), нарязани iizmelchayut мелница. Получената мляно стомаха поставя vbutyli капацитет от 3 - 5 литра и се загрява до изсипва 50sh С vodoyiz на базата на 1 литър вода 300-500 г от смляната маса. Има zhedobavlyayut 1% химически чиста солна киселина (плътност 1,19). Мас разбърква добре и се поставят в термостат, или на 15 -18 часа (или повече) в 37sh С-, или, ако otdelnogotermostata 42sh С, 18 часа (или повече). През protsessaperevarivaniyabutyl разклащат при първия по-често (след 1 до 1.5 часа), след това по-рядко. Добре смила пептон butylilezhit малък долния слой на фини тъмни osadka.Polnotu отлагане баластни протеини могат да се провери putemdobavleniya до 5 мл филтрува пептон 1 - 2 капки 10% NaOH, мътност не трябва poyavlyatsya.Deystvie ензим се спира чрез загряване във водна баня, постепенно привеждане на температурата до 80sh с, popokazaniyu установен с термометър потопен в бутилката perevarom.Nagrevanie продължава 10 минути. За тази цел, устройството mozhnoispolzovat Кох или автоклав. Tschatelnovzbaltyvayut бутилки, затворени с памук - марля с bumazhnymkolpachkom запушалка и пуснати на хладно сухо място за otstaivaniyapri температура не по-висока 12sh С Пептон използваем neranee от 7 дни, когато се установят плътно суспендира chastitsy.Neobhodimo добавя 20 мл хлороформ до 1 л пептон dlyakonservirovaniya и затваряне на бутилката с гумена запушалка. Това videpepton може да се съхранява без стерилизация при стайна temperature.Myasnaya vodaDlya месо за готвене вода двойна концентрация zhelatelnoispolzovat прясно месо млад животно upitannosti.Obezzhirennoe среда освободи от месо сухожилие премина cherezmyasorubku, налейте вода в 1 литър вода на 1 кг кайма iostavlyayut нощ при 4sh с, сместа се нагрява при сутрин asbestovoysetke в продължение на 15 - 20 мин. от момента на кипене. Готов otvarfiltruyut, мляно отделя, получената месото се излива vsterilnye вода бутилка 250 - 500 мл и се стерилизира течност parom3 последователни дни на 30 минути. Съхраняван при 4sh индикатор C.Bumazhki крезол krasnyy0,1 г крезол червено се разтварят в 100 мл 95% алкохол при температура iostavlyayut 37sh С за 24 часа, често с разклащане. Ден наследство се навлажнява с разтвор filtrovalnoybumagi ленти и бързо се суши. Bright Yellow - цветни документи в schelochnoysrede протича в различни нюанси krasnogo.SREDY ЗА ОПРЕДЕЛЯНЕ TSISTINAZNOY AKTIVNOSTISreda Pisa в OHF agareK 90 мл разтопен 1.5% агар OHF (НЕ допустима употреба Hottinger агар), рН 7,6, dobavlyayut2 мл 1% разтвор на L -tsistina с 0.1N разтвор на солна киселина (HCl), внимателно се разбърква и същия обем на 0.1N rastvoraNaOH да неутрализира киселината. Киселина и алкални разтвори dolzhnybyt взаимно титрувани, ispolzovatfiksanaly могат да бъдат получени чрез химичните promyshlennosti.Sredu стерилизирани при 112sh С в продължение на 30 минути, се съхраняват в продължение на 1 месец при 4sh C.Agar с цистин топи при 90SH C (среда не се вари -. Dlyasohraneniya цистин). Към охладен среда добавя 45sh С1-СО10% разтвор на оловен ацетат и 9 мл говеда серумни krupnogorogatogo асептично и минерална poprobirkam.Neobhodimo отбележи, че когато температурата 50sh С и по-висока, в присъствието на оловен ацетат, и серум мътен sredapriobretaet млечен цвят. Трудно е да се отчете rezultatovreaktsii.Sreda Пиза базирани търговска среда AGVDlya Пиза среда за готвене може да бъде на разположение на състава на търговски isbalansirovannuyu AGV среда, използвана vbakteriologicheskoy практика да се определи chuvstvitelnostimikroorganizmov към антибиотици. Претеглена част от сух среда AGV vkolichestve 2.7гр се въвежда в 90 мл дестилирана вода и се нагрява doee пълно разтваряне. Подготовка 5% natriya.Dlya хидрогенкарбонат разтвор се разтваря 0,5 г натриев бикарбонат в 10 мл дестилирана разтвор vody.Zatem се прибавя към 0,1 г L-цистеин и се загрява до polnogorastvoreniya цистин. След 2 мл кипяща алкален rastvoratsistina въвежда в 90 мл разтопен среда AGV, рН се регулира, и се стерилизира в do7,6 112sh С в продължение на 10 минути. Към стопения iohlazhdennoy 45sh до С чрез последователно се добавят: 10 mlsyvorotki говеда, 1 мл от 10% rastvorauksusnokislogo олово, прясно приготвени 1.5 мл стерилен 10% разтвор на натриев тиосулфат и се излива в probirkam.Rastvory оловен ацетат и натриев тиосулфат gotovyatextempore се използват стерилни епруветки и дестилирана вода се стерилизира чрез преминаващ пара, или във водна баня в продължение на 30 min.Danny variantsredy Pisa otsutstviiMartenovskogo използва в агара. Odnakoneobhodimouchityvat, chtodifferentsialno - диагностични свойства на тази среда comparisonwith среда получени в агар OHF малко vyrazheny.SREDY ЗА ОПРЕДЕЛЯНЕ уреаза AKTIVNOSTIProbu уреаза могат да бъдат поставени в две изпълнения на метода: Sachse Iput инокулиране на хранителната среда с mochevinoy.Prigotovlenie opredeleniyaureaznoy реагенти за активност по метода ZakseGotovyat реагент 2 - а и V.Reaktiv A: Урея 2% етилов алкохол G96 2 mlDistillirovannaya 4 mlReaktiv вода В: 0.2% разтвор fenolrot 1 mlOdnozameschenny калиев фосфат (KH РО) 0,1 r2 4Dv заместен калиев фосфат (К HPO) 0,1 gHlorid натрий (NaCI) 2 40.5 gDistillirovannaya voda100 mlReaktiv А не се стерилизира и се съхранява при 4sh C.Reaktiv на автоклавира течлив parom.Bulon mochevinoyK с 100 мл стерилен месо - или пептон Hottinger бульон (рН 7,0) се прибавя 1 г карбамид, и 0,2 мл от 1,6% алкохол rastvoraindikatora krezolrot. Сместа се излива в 2 - 3 мл в стерилни епруветки стерилизирани чрез преминаващ пара за 10 min.SREDA ЗА ОПРЕДЕЛЯНЕ saccharolytic AKTIVNOSTIDlya определящи saccharolytic активност rekomenduetsyaispolzovat среда 1% пептон vode.K 100 мл гореща дестилирана вода се прибавя 1 г пептон, 0.5 г от химически чист NaCl, и индикатор 1 мл Andrede.Ustanavlivayut рН 7,4, варени в продължение на 5 мин., филтрува се през хартиен филтър ilipolotnyany, довежда до първоначалния обем goryacheydistillirovannoy водата. Към това се прибавя една основа izuglevodov захароза, глюкоза (1 г), нишесте (0.5 д) .Among излива в епруветки в 2 - 3 мл и се стерилизира tekuchimparom продължение на 3 дни за 30 минути. или при 0.5 атм. 30 мин. Gotovyesredy индикатор Andred са безцветни или леко rozovatyyottenok.Indikator AndredePosuda за получаване на индикатора трябва да бъде суха, химически чисти, с шлифована probkoy.K 100 мл дестилирана вода се прибавя 0,5 г киселина fuksinai 16.4 мл 4-процентов разтвор на NaOH. Разтворът за ден ostavlyayutpri 37sh С, понякога разклащане два дни съхраняват nasvete и след това се отстраняват в тъмно място. Прясно приготвен rastvorimeet слама - жълта или леко розов оттенък, kotoryyischezaet по време на съхранението. При интензивно - розов okraskerastvora време на готвене индикатор трябва dobavitesche 1.6 мл 4-процентов разтвор NaOH.SREDA ЗА ОПРЕДЕЛЯНЕ нитрат редуктаза AKTIVNOSTIK 100 мл хранителен бульон (ВСН или Hottinger бульон) рН 7,3 - 7,5, без нитрити (проверка Grissaili Kasatkina реагент) се прибавя 0,1 г свободен nitratakaliya нитрит (KNO). Проверете отново за нитрит съдържание po32 мл и се разпределят в химически чиста, суха епруветка. Средата се стерилизира 15 min.pri 120sh C.Reaktiv GrissaRastvor 1: 0.8% сулфанилова киселина в оцетна 5N kislote.Rastvor 2: 0.6% алфа-диметил-5N uksusnoykislote.Pered naftalamin в извършване на реакционната смес равни обеми от разтвори 1 и 2. реагент годен за употреба в продължение на 15 минути, безцветен, pripoyavlenii розово оцветяване -. неизползваем. Решения 1 и 2 hranyatpri 4sh С за 2 mes.Reaktiv KasatkinaRastvor 1: 0.1% разтвор в дестилирана rivanola vode.Rastvor 2: 12% разтвор на солна киселина (HCI) .Преди изпълнение на реакционната смес равни обеми от разтвори 1 и 2. goden на реагент за използване в рамките на 15 минути. Решения 1 и 2hranyat в 4sh C за 2 mes.RETsEPTY KRASOK1. Алкална метиленово синьо Lefflera.Distillirovannaya СО1 99% воден разтвор на калиев хидроксид (КОН) 1 СО10% алкохолен разтвор на метиленово синьо 30 mlSmeshat. Оцвети за 1-2 min.2. Оцетна siniy.Toluidinovy ​​толуидиново синьо gLedyanaya оцетна kislota2 0.5 ml96% етилов алкохол 5 100 mlSmeshat mlDistillirovannaya вода. Оцвети за 3-5 min.3. Кристалвиолет fioletovyy.Kristallichesky R5 0.25% разтвор на оцетна киселина 100 mlSmeshat. Филтрира. Stain за 5-7 min.METODY CONTROL хранителен SREDBakteriologicheskomu контролен субект pervichnogoposevamateriala среда и среда за определяне генотоксични, saccharolytic и биохимични свойства. При производството sredvazhnym въртящ момент е предварителен контрол среда nasoderzhanie амин бази azota.METOD КОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА АМИНО метод AZOTAPrintsip се основава на блокиране на формалдехид в pH7,0 свободни амини и алкални титруване ekvivalentnogokolichestva карбоксилни групи. Начало и край titrovaniyaopredelyayut potentsiometricheski.Reaktivy: 1. Натриев хидроксид (NaOH) 0.1 N rastvor.2. Солна киселина (HCI) 0.1 N rastvor.4. Формалин (40% разтвор на формалдехид). Преди kazhdymopredeleniem необходимо за коригиране на рН до формалин 7,0.Hod opredeleniyaDlya анализиране на дадено количество течност проба. Dlyazhidkih хидролизати с ниска степен на смилане (0.1 - 0.2% от амин азот) - 3 ml- със средна степен на разделяне (0.3 -0.6% аминооксид) - 1 ml- с висока степен на разделяне (0.7 -1.3% аминооксид) - 0,5 ml- течна културална среда (0.08% -0.04 амин азот) - 3 ml- течни екстракти (0.02 -0.04% амин оксид) - 10 ml.V чаша 50 мл от пробата за изпитване и да dovodyatobschy обем дестилирана вода до 20 мл. Elektrodypotentsiometra потапя в изпитвания разтвор и pHrastvora регулира до 7.0 с 0.1 N NaOH 0.1 N rastvoraHCl или разтвор. След 2 мл неутрален формалин и се разбърква без отстраняване на електродите, съдържанието на пробата се титрува с помощта 0,1Nrastvora NaOH до рН 9,1. В титруване трябва ispolzovatmikrobyuretku 5 ml.Soderzhanie амино азот в пробата в% (X) се изчислява по формулата: A х К х 1.4 х 100Х = ----------------- , gdeB х 1000A - брой на разтвор 0.1 N NaOH в мл премина към titrovanieissleduemoy проба к - корекцията на титър 0.1 N NaOH-разтвор 1,4 - размерът на амин азот в мг което е еквивалентно на 1 мл NaOH-100 0,1Nrastvora - фактор на превръщане в интерес-B - количество на течна проба в милилитри, взети за анализ-1000 - коефициент на преобразуване мг g.METOD БАКТЕРИОЛОГИЧНИ CONTROL хранителен SREDV практически лаборатории за zhdaya партида културална среда, особено при използване на нови бази (ililaboratornogo промишлено производство) и нови съставки podlezhitbakteriologicheskomu контрол поради тяхното възможно nestandartnosti.1. Качествен контрол на носители за посяване първичен issleduemogomateriala определя чрез определяне на: а) покълване клетки Corynebacterium дифтерия-б) време за образуване на колонии) ingibiruyuscheyaktivnostiv спазват soputstvuyuscheymikroflory.S използвани за тази цел контрол генотоксични щам ilisvezhevydelennye генотоксични култура Corynebacterium дифтерия stipichnymi културно - морфологични свойства shtammzolotistogo ауреус (музейный или свежевыделенный).Суточные культуры коринебактерий дифтерии и стафилококка,вы ращенные на сывороточном агаре, смывают физиологическимраствором. Мутность полученной суспензии должна соответствовать10 ед. оптического стандарта мутности ГИСК им. LA Тарасевича(условно 1 млрд. бактериальных клеток в 1 мл взвеси). Из исходныхвзвесей культур коринебактерий дифтерии и стафилококка готовятпоследовательные разведения вфизиологическомрастворе(см. схему).СХЕМАПРИГОТОВЛЕНИЯ РАЗВЕДЕНИЙ КУЛЬТУРЫ КОРИНЕБАКТЕРИЙДИФТЕРИИ И СТАФИЛОКОККА+-----+-----------+---------------------------+------------------+| N | Кол-во | Объем вносимой | Условное кол-во ||про- | Fiziol. | суспензии, мл | микр. клеток ||бирки| р-ра, мл | | в 1 мл взвеси |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 8 || 1 |1,0| 1,0 из исходной взвеси| 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 7 || 2 |4,5| 0,5 из 1-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 6 || 3 |4,5| 0,5 из 2-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 5 || 4 |4,5| 0,5 из 3-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 4 || 5 |4,5| 0,5 из 4-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 3 || 6 |4,5| 0.5 
Споделяне в социалните мрежи: 

сроден

© 2011—2022 GuruHealthInfo.com