Техники

Тестване на прибори и устройства за събиране на телесни течности (Nechiporenko, 1999)

Algotest за количествено определяне на биологичната активност на химични съединения (Barashkov, Kiristaeva 1977)

Приготвяне на пробата за мулти-елемент анализ на методическите указания на руската Федерална санитарна инспекция център Мук 4.1.1483-03

метод за формулиране на определяне на олово в цяла кръв чрез ICP-MS изотоп разреждане (Паскал и сътр., 1995)

Метод многоелементни анализ на кръвни фракции

Определяне сулфа съединения (Prebsting и Гаврилова Timofeeva метод модификация за определяне на активността на N-ацетилтрансфераза) (Pershyn 1971)

Тестване на прибори и устройства за събиране на телесни течности (Nechiporenko, 1999)

контейнери за изпитване (тръби, флакони), спринцовки тип "пеперуда" системи (пластмасови спринцовки и епруветки).

1. Разтворител: смес от 1% HNO₃ и 0.001% Triton Х-100. Получава се като се използва дестилирана вода. 10 мл HNO₃ (Химически чист) се прибавя към 500 мл чиста вода в мерителна колба от 1 литър. След това се прибавя 1 мл Тритон Х-100. След разтваряне, обемът на сместа се довежда до 1 литър.

2. За тестване на пластмасови спринцовки, контейнери, капиляри вътре е обект и 1 мл от разтворителя се прехвърля в епруветката за анализ. В случай полученият разтвор се поддържа вътре в контейнера обърнат за покритие или контакта за 12-14 часа. В случай на изпитване метални игли се пропуска през 1 мл разтвор. След това всички аналити индивидуално изследвани за съдържание на метали.

3. Всички изчисления са извършени на 1 мл от разтвор. Общото съдържание на общата метал във всички устройства не трябва да надвишава 5% от средната еквивалентна изчислява нивото на съдържание на метал в биологичната проба.

Algotest за количествено определяне на биологичната активност на химични съединения (Barashkov, Kiristaeva 1977)

В сертификат-долу е описано изобретателя № 557098. получен в algotest 1977 гр. Въпреки че технически, този метод не е много сложно, е необходимо да се изпълняват няколко условия, по-специално, за да се гарантира наличието на lyuminostata (непрекъсната флуоресцентно осветление флуоресцентни лампи с интензитет от 3700 ерг / cm² секунди, температура на инкубиране 29 ± 3 ° С) и имат опит с водорасли.

Тест Мезофилната организъм е щам на зелени водорасли Хлорела Pyrenoidosa 82 от колекцията на кафенета. MSU микробиология. Тя се отглежда 3 дни при непрекъсната светлина, лампа с нажежаема жичка с интензивност от 10 януари⁵ ерга / cm² и при 28 ° С пълен Tamiya среда урея и допълни, микроелементи в Arnon-4 разтвор.

Преди клетки експеримент водорасли (средата на дневника фаза на растеж) се отделя от средата чрез центрофугиране (3 tys.ob / мин, 1200 грама, 5 минути), промива се с 0.01% натриев NaCl и разреден 5 пъти Допускане-1 среда с рН от около 7.0, е напълно лишена от органични добавки.

Оптималната концентрация на водорасли клетки за максимална чувствителност (10 май⁵ - 10 април⁶/ Ml), съответстващо на 15-40 единици "индекс на силика-гел" (SP), която е равна на масата на суспензия в пирогенният силициев диоксид CSC мг / мл със същата оптичната плътност при 578 нм като водорасли суспензия.

При оценяване на токсичността на вещества или смеси от тях са възможни варианти, свързани с разтворимостта на изпитваните вещества. водоразтворимо вещество се въвежда в суспензията при концентрации, които се различават от един ред, например, 10, 1, 0.1, 0.01 мг / мл. Водонеразтворимо вещество в sverhrastvoritele прилага, например, диметилсулфоксид (DMSO) или диметилформамид (DMF). концентрация Sverhrastvoriteley не трябва да надвишава 3% поради присъщата им токсичност.

Варено експериментална и контрол с идентичен първоначалната суспензия SP₍₁ излива в 20-25 мл широки колби устата или Erlenmey-ЕРА (50-100 мл) или в стандартни епруветки в стелажи прозрачни, затворени с памук и се инкубира при 85-95 lyuminostate час. Технически удобен и задоволителен за статистическата обработка да се повтаря всяка опция 5-кратно.

След инкубиране колби (или тръби) се поставят в баня от ултразвукови чисти и ултразвуково облъчва в продължение на 10-15 секунди с 100 вата за да се получи хомогенна суспензия. Те определят JV опит и контрол (JV_K) Чрез абсорбция при 578 нм (или на броя на клетките). Изчисленията по формулата:

където% T₂ - процент промяна на културата време за удвояване. Положителният резултат показва наличието на забавен растеж и токсичен ефект, отрицателна - стимулиращ ефект.

Критичната концентрация (C_кр) Са графично. Ординатната ос представлява изчислените стойности на% T₂ (Над 0 - положително, нисш - отрицателен) и абсцисата - концентрацията на тестваното вещество върху логаритмична скала. Поставете пресечната точка на отсечка между точките с по-големи и по-малки стойности% T₂ 5% ниво, успоредна на оста на абсцисата дава стойността на К_кр- 5% се приема като критичното ниво поради факта, че някои вещества не предизвикват ясно стимулиращ ефект и да понижат под 5 увеличава относителната грешка при определянето.

Много подходяща реализация резултат е, в допълнение към K_кр, Изчисляване на пробата токсичност по отношение на токсичността на меден сулфат за "Tox" (T_с), Определени в същата серия от експерименти: T_с = K^с_кр/ K_кр. Избор като стандартен модел токсичност на меден₄ се дължи на факта, че този материал не отговаря на следните две условия: 1), че е най-широко като модел на флуор и 2) дава ясна стойност на K^с_кр най-малко разликата между токсични и стимулиращи концентрации.

PОТЕ: От явления селективна токсичност, следва, че универсалните опитни организми не съществуват. Известни тестове като тест с водни бълхи, въз основа на определяне на LD₅₀, че на практика позволява да се определи критичната концентрация на изпитваното вещество, т.е. по-висока организъм, който жизнената дейност се инхибира. В допълнение, опитният организъм за експерименти трябва да бъде в стандартната физиологичното състояние по всяко време на годината. Това изискване е най-подходящ за едноклетъчни зелени водорасли.

Използването на мезофилните щамове на Хлорела дава възможност да се увеличи чувствителността на биологичното изпитване в сравнение с всеки друг с повече от два порядъка, по много прост начин. Предварително щам отглежда в пълна среда с карбамид, която е мезотрофни. След това клетките се промиват със средна и преместени в беден аВтотрофична условия, които се подлагат на двойно физиологичен шок.

Нуждата от въвеждане на вътрешен стандарт токсичност произтича от невъзможността за провеждане на експерименти в различните сезони при същите условия. K^с_кр Тя варира от експеримент на експеримента, но в повечето случаи е около 3 мг на меден₄/ L.

Приготвяне на пробата за мулти-елемент анализ на методическите указания на руската Федерална санитарна инспекция център Мук 4.1.1483-03

За подготовка на пробите се използва ICP-MS, за да се използва ястия флуоропласт старателно се промива в ултразвукова баня, разредено 1: 1 HNO₃ и се промива три пъти с дейонизирана Н₂О.

Избор, съхранение и подготовка на проби

коса закрепен за задната част на главата в размер на >0,1 гр, бе обработен с ацетон в продължение на 10-15 минути, промиват се 3 пъти с дейонизирана Н₂ох.

нокти нарязани с двете си ръце, и се третира по същия начин. И двата обекта се съхраняват в хартиени пликове.

кръв от лакътния вена в количество >1 мл съхраняват в хладилник в продължение на 3-5 дни или във фризер (-18 ° С) или се лиофилизира. За дългосрочно съхранение пробите се поставят в полипропиленови епруветки за еднократна употреба с тесни капаци.

По същия начин, обработва кръв при получаването на лекарства еритроцитна, плазма и серуми, и пробата мляко, сперма, лимфа, слюнка.

урина (Сутрин или дневно) в количество не по-малко от 5 мл се поставя в запечатан пластмасов контейнер в хладилник до 3 дни или замразени.

биопсии мускулни, кожата, епителни, черен дроб и др. веднага след приготвянето се претегля, поставен в херметизирана пластмасови съдове и се съхраняват в хладилник в продължение на 3-5 дни или замразени.

Проби от костите и зъбите се поставя в запечатана пластмасова опаковка от лабораторията.

препарати аминокиселини, мултивитамини, БАН и суровини за тяхното производство се предлага в производителя на пакет. Минималното тегло от 10 г твърди препарати, течност - 100 ml.

Open разлагане на проби

Косата, ноктите и др. Твърди проби. Една част от пробата се поставя в цилиндър тефлон се прибавя 0,2-1,0 мл концентрирана HNO₃, защитно покритие лабораторен филм и поставени в термоблок на 0.5-1.0 часа при 115 ° С до пълно разтваряне. Разтвореният Пробата се количествено прехвърля в измервателна тръба и водни промивки се довежда до обем 10 мл, след това - на анализа.

Видео: Макс OT. техники за обучение

течни проби. Точно претеглено проби (0,1-0,5 мл) се поставят в цилиндър тефлон, определяне на теглото на епруветки маса разлика преди и след получаване на пробата. Се добавя 0,3-1,0 мл концентрирана HNO₃ и хомогенизирана проба, както е описано по-горе.

За да се предотврати отлагането на протеини и компенсиране на проби висок вискозитет позволи просто разреждане на пробата с дейонизирана вода, последвано от подкисляване с коефициент на разреждане на най-малко 1: 100.

микровълнова разлагане

Прецизно претеглена проба се поставя в обвивката тефлон, 5 мл HNO₃ и се слага в микровълнова фурна. Разлагане се извършва от продуцента на програмата (обикновено 5 минути при 200"C) количествено се прехвърля в епруветка и обемът се довежда до 10 мл с вода. Проба от 1 мл се довежда до обем от 10 мл 0,5% HNO₃ и анализирани.

Позволени директна селекция на аликвотна част от разлага обема на пробата от 0.1-0.5 мл. За да се компенсира грешки преди разлагане разреждане на пробата въведе вътрешен стандарт (В, резус фактор) На концентрацията на анализираното вещество в крайния разтвор е около 10 г / л. Трябва да се добави разтвор на вътрешен стандарт за всички единични и калибриращи разтвори.

Корекция Isobar припокриване полихидридни наслагвания и шума от движението

Смущения отстраняване на грешки техники, открити от определяне на стандарта на добавянето и измерване серийно разредена серия от проби.

корекция изобарен Наслагвания, произведени автоматично, в съответствие с програмните продукти на инструменти за ICP-MS. Точните коефициенти за корекция определят експериментално.

корекция полихидритен наслагвания изисква вниманието на оператора за премахване на смущения. Устройствата с реакционната клетка се отстранява по-голямата част на многоатомни припокриване по принцип. Специфични методи за различни изпълнения ръчно отстраняване на смущенията са известни и са показани в съответните инструкции на съществуващото устройство.

шума от трафика чрез коригиране на максималния възможен разреждане и фон нормализиране киселина. Използването на вътрешен стандарт елиминира грешки примерни разреждане и включват много от ефекта на матрица на плазма и йонен поток.

Калибрирането на инструмент, измерване, анализ на измерванията и извършване на вътрешен контрол на оперативната описани в съответните инструкции за инструмента. производители на оборудване за провеждане на подходящо обучение на операторите в рамките на договори за доставка на оборудване.

метод за формулиране на определяне на олово в цяла кръв чрез ICP-MS изотоп разреждане (Паскал и сътр., 1995)

Прецизно претеглена проба от цяла кръв два 0.5 В един прибавя около 100 мг разтвор (около 100 микролитра) от SRM 983 стандарт, съдържащ 92,15% ат. ²⁰⁶Pb до крайна концентрация от около 1 мг Pb/ G. В две порции се прибавя 2 мл концентрирана ултрачиста HNO₃ и да ги запишете в микровълнова фурна в претеглени PTFE съдове.

Остатъци охлажда, прехвърля се в епруветка 15 мл и се разрежда до 10 мл с вода. Проби се анализират чрез ICP-MS и определяне на съотношението ²⁰⁸Pb/²⁰⁶Pb. концентрация Pb в оригиналната проба се изчислява като се използва формулата:

където [Pb] - концентрация Pb в неизвестна проба в нг / г,

К - съотношението на относителната атомната маса на природен Pb на относителната атомната маса Pb в пробата с добавен ²⁰⁶Pb (А_R = 206,063)

в_ите - концентрация Pb в пробата с добавен ²⁰⁶Pb в нг / г,

m_SP - тегло (г) се прибавя разтвор на ²⁰⁶Pb,

m_см - тегло (ж) от оригиналната проба,

0,0125 - относителното съдържание ²⁰⁸Pb в пробата с добавен SRM 983

0.921497 - относителното съдържание ²⁰⁶Pb в същия разтвор,

208/206 (S) - съотношението в прибавя разтвор,

А₂₀₆ и A₂₀₈ - естествено съдържание ²⁰⁶Pb и ²⁰⁸Pb в оригиналната проба.

Метод многоелементни анализ на кръвни фракции

за плазма обикновено в стандартна структура пластмасова тръба, принадлежащи към антикоагуланти (хепарин-Na или -Ли сол, K₂-EDTA Трилон В = 9NC натриев цитрат, оксалат) Вземи кръвна проба. Клетките трябва да бъдат разделени възможно най-скоро чрез центрофугиране, като краткотраен ефект на хепарин антикоагулант и променя значително елементарния състав на серум. За дългосрочно съхранение на кръвни проби в хладилника е неизбежен процес на хемолиза се случи, и във фризера на кръвни клетки са унищожени.

за серуми позволи на кръвна проба коагулирам ( "Къдря"), след което фибриновия съсирек се отделя заедно с клетките. Ако искате да получите филтрат без протеин (БФБ), след това към 1 част кръв прибавя 9 части 5% ТСА (ТСА). Утайката на протеин се отстранява чрез центрофугиране (2 х. Rev / мин, 10 минути). За определяне на елементите на супернатантата се използва.

0.5 мл кръв или плазма, или серум се поставя в микровълнов флакон се прибавя 4,5 мл 30% HNO₃. съдържание минерализирана (Например, в една фурна фирма микровълнова Berghof Speedwave ™ MWS-2 Програма P₆ Метод 3-стъпка (25 мин)).

Минерализиран разтвор се разрежда с 5% HNO₃ 10 мл (разреждане 20 пъти) и се използва за определяне на ICP-MS.

забележкаВ случай на разстояние мащаб резултати за отделните елементи на аналита разрежда. Всички разреждания под внимание в последните минути на резултатите.

Определяне сулфа съединения (Prebsting и Гаврилова Timofeeva метод модификация за определяне на активността N-ацетилтрансфераза) (Першин, 1971)

Реактиви:

1) 15% трихлорооцетна киселина (ТСА)

2) 0.5% разтвор на нитрит₂

3) наситен разтвор на СН₃COONa (1 част сол се разтварят в 2,8 части Н₂О)

4) 0.5% разтвор на ацетилиран Н-киселина (1,8-aminooksinaftalin-3,6-дисулфонова киселина) (получен в деня на експеримента)

5) 7-10% разтвор на HCl

6) Основното стандартен разтвор

10 мг sulfadimezin norsulfazola или поставя в мерителна колба от 100 мл и 2.1 мл 0,1 N NaOH до пълното разтваряне на сулфаниламид. долива с дестилирана Н₂О до марката, т.е. преди лекарствена концентрация 100 мкг в 1 мл разтвор. Разтворът се съхранява в хладилник.

Калибрационна крива се конструира като се използва серия от разтвори на изследваното лекарство, взета за анализ photoelectrocolorimeter (FEC) със син филтър, например, 10-8-6-4-2 мкг / мл.

Предметът е дадено 1-2 таблетки на сулфа лекарства, и се събира ежедневно урината. Тръбата се пълни с 0.2 мл урина се прибавят 2 мл разтвор №1 + 1 № 5 мл и 6.8 мл дестилирана Н₂О. След разбъркване и филтриране 1 мл от филтрата съответства на 0,02 мл урина.

Анализ на свободен сулфаниламид. В епруветката се излива 2.5 мл урина на филтрат се излива 0,1 мл разтвор № 2, се разбърква и след 10 минути се излива 1,5 мл разтвор № 3 и отново се смесва. Веднага, 0,25 мл от разтвор № 4. След пълно смесване изглежда розово оцветяване. След 15 минути, интензитетът се измерва на FEC със син филтър.

Работни стандарти лекувани Тейт същото. От стандартната крива концентрация на свободно лекарство се изчислява, като се вземат предвид всички разреждания.

Анализът на общата сулфаниламид. При приемане на лекарството в тялото на субекта ацетилиран N-ацетилтрансфераза. Тази част може да се определи само след хидролиза. В епруветката се излива 2,5 мл проба и 0.25 мл № 5. По същия начин също така работи със стандартни разтвори. Епруветката със сместа се поставя във вряща водна баня за 30 минути. След охлаждане, обемът на течността в тръбата се регулира до 2.5 мл дестилирана Н₂О. Освен това работим с решение в съответствие с метода за определяне на свободен сулфаниламид.

Калибрационна крива построена с стандартен работен разтвор след хидролиза се изчислява общото количество на лекарството (свободна и ацетилираната) в пробата. След изваждане на количеството на свободно лекарство, получен в размер на ацетилиран препарат %% спрямо общото количество.

Медицински bioneorganika. GK овца