Физиология на микроорганизми: свойствата култивиране на бактерии, изолиране на чисти култури от микроорганизми

Културни свойства бактерии

Съдържание

Културни свойства бактерии
Изолиране на чисти култури от микроорганизми

Към културата (или macromorphological) свойства включват характеристики на микробен растеж на твърди и течни хранителни среди. На повърхността на твърди хранителни среди, в зависимост от културата, микроорганизмите могат да растат като колонии, инсулт или непрекъснато морава.

Колония наречена изолирана група от клетки от един вид, произхождащи от една клетка (клон). В зависимост от това къде микроорганизма нараства (на повърхността на твърди хранителни среди или в дебел) разграничаване на повърхността, дълбочината и долната колонията.

Колониите се отглеждат върху повърхността на средата, са разнообразни: те са видово-специфични, и тяхното проучване се използват за определяне на специфична аксесоар култура под изследване.

При описанието на колониите се вземат предвид следните характеристики:
1) колония форма - кръгла, amoeboid, rizoidnaya, неправилна и др..

2) за размер (диаметър) колонии - много малък (точка) (0.1-0.5 mm), малки (0.5-3 mm), среден размер (3-5 mm) и големи (повече от 5 mm в диаметър );

3) колония повърхност - е гладка, груб, сгъната, набръчкана, с концентрични кръгове или радиално набраздена;

4) колонии профил - плоска, изпъкнала, конична, crateriform др..

5) прозрачност - тъпа, матирана, гланцирана, прозрачни, брашнеста;

6) Цветът на колония (пигмент) - безцветен или пигментиран (бяло, жълто, златисто, червено, черно), подчертават избора на пигмента в среда с оцветяване;

7) ръб на колониите - гладка, вълнообразен назъбени, ресни и др..

8) колония структура - хомогенна, фино или едрозърнест, struychataya- ръб и структура колония се определя с помощта на лупа или микроскоп при ниско увеличение чрез поставяне на Петри блюдото със засяването на етапа на микроскоп надолу капак;

9) определяне на последователността kolonii- докосва линия: колония може да бъде плътен, мек, растящи навътре в агара, мукозално (за бримкови участъци), трошлива (лесно се разграждат при контакт с линия).

Дълбоките колонии често приличат повече или по-малко сплескани lenticels (Форма овали със заострени краища), понякога бучки от вълна с нишковиден придатъци към културалната среда. Образуването на дълбоки колонии често придружено от разкъсване на плътна среда, ако микроорганизми, изолирани газ.

Дънни колонии обикновено имат формата на тънки прозрачни филми, пълзящи по дъното.

Удобства колонии могат да варират с възрастта, те зависят от състава на средата и температурата на културата.

Растежът на микроорганизмите в течна среда под внимание, като се използва четири-седем дни културата се отглежда в стационарни условия.

В течна среда по време на растежа на микроорганизмите се наблюдава помътняване на средата, образуването на филм или остатък.

Когато отглеждат на полу (0.5-0.7% агар) хранителни медийни мобилни микроби предизвикват изразена мъгла, все още формират расте само в хода на засаждане на убождане в сряда.

Често микробен растеж е съпроводен с мирис пигментация среда диоксид. Характерен мирис на някои култури на бактериални видове, свързани с образуването на различни естери (uksusnoetilovogo, uksusnoamilovogo и др.), Индол, меркаптан, сероводород, скатол, амоняк, маслена киселина.

Способността да образуват пигменти е присъщо на много видове микроорганизми. Химическата природа на пигментите разнообразни: каротеноиди, антоцианини, меланини. Ако пигмент е неразтворим във вода, оцветени култура nalet- само ако той е разтворим, боядисани и хранителна среда. Смята се, че пигментите защита на бактериите от разрушителното действие на слънчева светлина, така че въздуха и много пигментирани бактерии, в допълнение, пигменти са включени в метаболизма на тези микроорганизми.

В природата съществуват така наречените фосфоресциращи бактерии култури, които светят в тъмното зеленикаво-синкав или жълтеникав светлина. Тези бактерии се намират главно в река или морска вода. За луминесцентни бактерии - photobacteria -otnosyatsya аеробни бактерии (Vibrio, коковидна, пръчки).

Изолиране на чисти култури от микроорганизми

Чиста културата се нарича култура, която съдържа микроорганизъм видове. Изолиране на чисти култури от бактерии -Required стъпка на бактериологично изследване в лабораторията за изследване различни микробно замърсяване на околната среда, и по принцип за всеки работа с микроорганизми.

Изпитваното вещество (вода, почва, въздух, храна или други предмети) обикновено съдържа микроби асоциация.

Изолиране на чиста култура ни дава възможност да изучават морфологични, културни, биохимични, антигенни и други функции, в зависимост от съвкупността от която се определя от вида и типа на членството на патогена, т.е.. Д. Произведени неговото идентифициране.

За изолиране на чисти култури от микроорганизми се използват техники, които могат да бъдат разделени в няколко групи:
1. Метод Пастьор - серийно разреждане на изпитваното вещество в течна хранителна среда до концентрация от една клетка в обем (историческо значение).

2. Методът от Koch ( "окабеляване плака") - серийно разреждане на изпитваното вещество в агара стопения (температура 48-50 ° С), последвано от напълване в блюдо на Петри, където агар втвърдява. Сеялки марки, като правило, на три или четири последното разреждане, където бактерии става оскъдни в бъдеще, с растежа на петрита появяват изолирани колонии са образувани от един от оригиналния майка клетката. От изолираните колонии в дълбочината на агара са чисти култури от бактерии върху прясно засадят отново среда.

3. Метод Shukevich - използва се за получаване на чисти култури от Proteus и други микроорганизми, имащи "животно" растеж. Посяване на изпитвания материал за производство на кондензация на вода в долната част на наклона. Подвижни бактерии (Proteus) са в състояние да ходи нагоре по наклон култура, все още остават форми да расте в долната част, на мястото на инокулацията. Субкултивиране горните ръбове на културата, е възможно да се получи чиста култура.

4. Метод Drigalski - широко използвани в бактериологични практика изпитвания материал се разрежда в епруветка със стерилен физиологичен разтвор или бульон. Една капка от първия материал се въвежда в чашата със стерилна стъклена шпатула и разпространение върху повърхността на средата. След това, по същия шпатула (не гори през него в пламъка на горелката) да направи една и съща култура във втория и третия плочи.

С всеки инокулиране на бактерии на шпатула е по-малко и по-малко, и се поставят на трета чаша, бактериите се разпределят върху повърхността на културалната среда отделно един от друг. След 1-7 дни в инкубатор водене чаши (в зависимост от скоростта на растежа на микроорганизми) в третата чашата дава всяка бактерия клетъчен клон, изолиран образуващи колонии, които субкултивирани върху агар, за да се натрупват чиста култура.

5. Метод Weinberg. Специфични възникнат затруднения при разпределението на чисти култури от облигатни анаеробни бактерии. Ако контакт с молекулен кислород не причинява незабавно смърт на клетките на културата, произведена по метода на Drygalski, но след това незабавно се поставя в чаша Анаеробна. Въпреки това, повечето от тях са метод за разплод. Същността се състои в това, че разреждане на материала се провежда в стопен и се охлажда до 45-50 ° агарова среда.

Уверете се серийни разреждания от 6-10, след това средата, в епруветките се охлажда бързо и се излива повърхностен слой на смес от парафин и вазелин масло, за да се предотврати навлизането на въздух във вътрешността на хранителната среда. Понякога културалната среда след засяването и разбъркването се прехвърля в стерилна епруветка или капилярни Burri Pasteur пипета, чиито краища са запечатани. Ако успешно размножаване в тръбите, тръбите Burri, Пастьор пипети анаероби растат изолирани колонии. медии Използване култура, изяснени че изолираните колонии са ясно видими.

За да се извлече изолирани колонии анаероби тръба нагрява леко въртенето в пламъка, с агар, в непосредствена близост до стените, и съдържанието на епруветката се топи като агар колона плъзга в стерилна петриева паничка. Колоната агар се нарязва със стерилни пинсети и премахване на контура на колония. Извлечените колонии бяха поставени в течна среда, подходяща за развитието на микроорганизми разпределени. Агар среда издухан от тръба Burri на, преминаване на газа през набивка от памук.

6. Метод съгласно Hungate. Когато искат да се изолирани колонии от бактерии до особено висока чувствителност към кислород (строг аероби) с използване на метода на въртяща Hungate тръби. Към този разтопен агар среда, инокулирано с бактерии в постоянен ток чрез тръба инертен газ, освободен от примеси на кислород. След това тръбата се затваря с гумена преграда и се поставя хоризонтално в скоба, въртящи probirku- сряда с равномерно разпределени по протежение на стените на тръбата и тънкослойна втвърдява. Прилагане на тънък слой от тръба, запълнена с газова смес позволява да се получат изолирани колонии ясно видими с невъоръжено око.

7. изолиране на единични клетки, използвайки микроманипулаторът. Микроманипулаторите - устройство, което позволява на микропипета или специални mikropetli премахване на една клетка от суспензията. Тази операция се контролира под микроскоп. На етап на камера влажност микроскоп определен в която лекарството се поставя "висящи капка". носителите на операционни статив фиксирана микропипета (mikropetli), чието движение в зрителното поле на микроскопа прави с микрона точност благодарение на система от винтове и лостове на. Изследовател търси в микроскоп, единични клетки микропипети извлича и ги пренася в епруветки, съдържащи стерилна течна среда, за да се получи клетъчна култура.

LV Тимошенко, MV Chubik

Споделяне в социалните мрежи:

сроден