Лимфокин активирани клетки убийци за имунизация. Ефект на лимфокин активирани клетки убийци в вродения имунитет

IL-2 или екзогенни аналози стимулират пролиферацията на природните клетки убийци и повишаване на тяхната цитолитична функция, което води до образуването на така наречените лимфокин-активирани убиец (LAK). По своята същност, LAC са цитотоксични лимфоцити, които са в състояние да унищожи клетки, инфектирани с вируси или вътреклетъчни бактерии и туморни клетки. В момента възможност за терапия LAK проучена при различни форми на рак. В инфекциозни заболявания метод адоптивен трансфер LAC практически проучена.
това въпросът Бяхме учи в инфекция мишки К. пневмония K2 CBA култура на щама.

Лимфокинактивираните убиец ML получени от далаци на мишки, когато се култивират в продължение на два дни в RPMI-1640 среда, съдържаща 1000 IU / мл IL-2, клетките се промиват и се използва в експеримента.
проучване Morfogistohimicheskie Те показаха, че LAK клетки представляват голям брой лимфоидни и тип immunoblast Пролимфоцитите с базофилна цитоплазма. На петна често се намират в клетъчното делене митотичния държавата. В фазово контрастна микроскопия LAK клетки представляват пролифериращи конгломерати.

По този начин, когато Ефекти на IL-2 в МТ далаците на мишките настъпили LAK поколение, характеризиращ се с пролиферацията и активирането на лимфоидни клетки. Повишена експресия на активиране onnyh антигени, които са функции имунофенотипа LAC също свидетелства лимфоцитното активиране процеси. В допълнение, ние открихме, че LAC имаше значително по-висока активност в сравнение с убиец непокътнати ML по отношение на NK-чувствителна клетъчна линия на миши лимфом YAC-1.

Според общоприетото схващане, NK - главен субпопулация на лимфоцити, продуциращи рецептор r75r верига IL-2 и селективно активират и пролифериращи под влиянието си за да образуват LAC могат ефективно да лизират тумор прицелни клетки. Въпреки това, заедно с посочените по-горе идеи, има доказателства за наличието на населението в ЛАК NKT клетки, които експресират не само NK (CD 16, CD56) маркери, но също така и Т-клетъчна диференциация антигени (CD3, CD4, CD8).

тези данни съобразят предишното предложение NK-клетки, които се считат не само като отделна субпопулация, но също и като етап на диференциация на зрели лимфоцити. От зрели лимфоцити чрез инкубиране с IL-2 могат да бъдат получени от така наречените NK-LAK клетки.

В нашия ML експерименти след култивиране далак с IL-2 бяха получени LAC експресиране на молекулата активиране мембрана (CD25), и молекули на главния комплекс хисто-съвместимост на МНС I, МНС II. В същото време, в популацията на LAC освен NK, настоящите експресиращи клетки и Т-клетъчна диференциация антигени (CD3, CD4, CD8).

Последни в същите количества се откриват в първоначалната популация ML. Използваната технология получаване лимфокин-активирани убиец Това е предвидено значително увеличение в NK-клетки с 1,5 до 20,3%, и клетките, съдържащи маркерни молекули CD25 и представянето на антигенен МНС I и II.

Полученото суспензия лимфокин активирани клетки убийци се прилага на мишки интраперитонеално при 2.5 х 106 клетки в 0,5 мл от 0,9% разтвор на натриев хлорид. След това, интраперитонеално инжектирани с 250 клетки в обем от 0.5 мл К пневмония К2. Като контроли се използват ML култивирани в присъствието на РНА (10 мкг / мл).

Лимфокинактивираните убиец заразени К. пневмония (100 LD50) мишки осигуряват 100% преживяемост на животните почти едновременно интраперитонеално приложение на микробни клетки и убиец. ML, РНА-активирани, защитен в 50% при 100% унищожение на интактни мишки, получаващи заразяване същата доза.
Нашите проучвания потвърждавам проучване относно използването на LAC за адоптивна имунотерапия, въведена в мишки интраперитонеално LAC К. пневмония К2 предотвратява развитието на заболявания при животни.

При определяне на цитокини в културална среда бяха открити LAC повишено съдържание на IL-1 след 24 ч и 72 ч инкубация (254 + 12,3 пг / мл и 213 ± 11.5 пг / мл, съответно) след 72 часа - IL-6 (224 ± 21 2 пг / мл) и IL-10 (150 ± 10,5 пг / мл) в сравнение с културата мл (съдържание на тези цитокини в контролите не надвишава 25-80 пг / мл) се инкубират без IL-2. Интересното е, че в културална среда LAC не се увеличи съдържанието на регулиране IL-12, които са в значителни количества, определени в културалната среда DK.

цитотоксични Дейността на лимфокин-активирани убиец, получени от далаци на мишки (СВА) се определят на NK-чувствителен YAC-1 миша лимфома клетъчна линия в възстановяване Тест 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолиев бромид (МТТ-тест). Туморните клетки (1 х 104 в 1 мл) се инкубират в културална среда с LAK в различни съотношения и чрез абсорбция при 540 нм се изчислява процент на туморния клетъчен лизис (процентна цитотоксичност).
Квалификация килърна активност на ефекторни клетки показа, че LAC притежават значително по-висока NK-активността в сравнение с интактен мишки ML.

В съотношение 1: 5 и LAK туморни клетки Миши лимфом YAC-1 цитотоксична активност на клетки-убийци се увеличава 6-кратно в сравнение с ML. При тези условия, 15.5% ML лизирани клетъчната линия К562, докато при подобни условия LAC причинени 92.2% смъртта на туморни клетки (р < 0,01). В меньших соотношениях мишени/эффекторы (1:2 и 1:1) эти различия не столь значимы, хотя цитотоксическая активность ЛАК превышает таковую у МЛ интактных мышей.