Ctarenie в клетъчни култури

Видео: Jeunesse Global FINITI ™ Cellular стареене свършва тук

Съдържание

Видео: jeunesse global finiti ™ cellular стареене свършва тук
Критериите и причините за смъртта на клетъчни култури

Използването на клетъчни култури в геронтология предлага уникална възможност за изучаване на механизмите на стареене и да намерят влияния, които оказват влияние върху този процес.

По-специално, на метода на клетъчна култура позволява да се решат следните по-важни задачи.

1. Сравняване на култури от клетки, получени от донори на различна възраст, е възможно да се направи разграничение между възрастовите промени на конститутивна индуциран. Например, беше установено, че митотичната активност на човешки фибробластни култури, които са при идентични условия, намалява с увеличаване на възрастта на донорни клетки (Schneider, Mitsui, 1976 г. Schneider, 1979).

Следователно наблюдава в стареещи тъкани организми намаляват в митотична активност (Gelfant, Smith, 1972- Cameron, побойник, 1976), свързана към конститутивен промени клетки самите.

От друга страна, свързана с възрастта увеличение на индукционен период тирозин черен дроб под въздействието на хидрокортизон (Adelman, 1972) следва да се счита, индуцирана поради различни възрасти в култури от хепатоцити на плъхове се наблюдават разлики в индуциране на ензима (Britton и сътр., 1976). По този начин, приложението позволява на клетъчните култури, за да се определи характера на стареене.

2. Методът на клетъчна култура предоставя уникална възможност за научни изследвания и внимателно проучване на конститутивен биохимически (Vilenchik и др., 1979) и цитология (Schneider, 1979), свързани с възрастта промени. Този метод също така ви позволява директно да провери теорията на стареене (Danner и др., 1978).

3. Сравнително изследване на клетъчни култури, получени от различни животни, дава възможност за идентифициране на характеристиките на клетки от особен интерес за биологията на стареене. Например, беше установено, че животните положително корелира с простатата фибробласти в способността култура за ремонт UV-индуцирано увреждане на ДНК (Hart, Setlow, 1974) и отрицателно корелирани с интензивността на свързването на канцерогени на ДНК на фибробласти на тези животни (Schwartz, Мур, 1977, 1979). Ето защо, механизми за защита на генома от повреди са на геронтологията особен интерес.

4. Дългосрочно култура (около една година) ин витро клетки могат да моделират много промени, настъпили по време на стареенето. Въпреки че въпросът за адекватността на ин витро условия условия ин виво остава открит въпрос, стареенето клетъчните култури е посветена на увеличаване на броя на експериментален, преглед (Hay, 1967 Бершад, Gelfand, 1970- Cristofalo, 1972- Hayfiick, 1977 г. Гаврилов, Гаврилова, 1978) и теоретична работа (Olovnikov, 1973 Holliday, 1975- Хирш, 1978- Гаврилов, Yaguzhinskii, 1978).

Критериите и причините за смъртта на клетъчни култури

Текущо инсталирани Limited продължителност на живота (RV) следните клетъчни култури от нормални човешки фибробластни клетки (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965- Harper, Grove, 1979), коне, няколко вида кенгура (Stanley et AL, 1975 г.), торбести Potorous tridactylus (Cristofalo, 1972- Stanley и др, 1975), костенурки (Goldstein, 1974), норка (Hayfiick, 1975), пилешки (Каджи, Matsuo, 1979) и миши (Hayflick, 1975, 1977) -. епидермални кератиноцити (Rheinwald, Green, 1977), клетъчна глията (Brunk`et др., 1973) и човешки черен дроб (Kahn и сътр., 1977a, 1977b) на нормални хондроцити (Mayne и сътр., 1976) и Rous саркома вирус-трансформирани пилешки фибробласти (Ponten, 1970- Leblond-Larouche, Morais , 1976).

Въпреки това, критичен анализ на литературни данни (Гаврилов, Гаврилова, 1978), се оказва, че все още няма общоприети количествени критерии за клетъчна култура на смъртта, и себе си понятия - "смърт" и "продължителност на живота" на културата - силно условни и субективни.

Повечето изследователи наричат култура мъртъв, ако в рамките на един произволно предварително зададен интервал от време (обикновено една до четири седмици), престава да се увеличи неговата здравина до желаната стойност, въпреки благоприятните условия за растеж (обикновено е зададен номер, 2-4 пъти повече от броя на първоначално култура) ,

Съгласно тази дефиниция не се изисква смъртта на клетки в култура, като всяка култура на жизнеспособни, но не са делящите се клетки, от това определение, да се счита за мъртъв. Освен това, културата на мъртвите продължава да нараства бавно, въпреки че те имат ниска митотична активност и съдържа само 10-20% от клетките способни репликативна ДНК синтез (Cristofalo, Sharf, 1973 Milo, Hart, 1976).

Тези култури са понякога спонтанно се възстановяват нормалния растеж и след това направи няколко удвояване на населението преди следващия "смърт» (Holliday, Тарант, 1972 г.). Маса клетъчна смърт в края на културата на живот, който придава голямо значение на ранните работи (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965), е един артефакт на презасяване на работа.

Фактът, че чрез култивиране на клетките субкултивират редовно, т. Е. Към обработка субстрат клетъчен слой 0,1% разтвор на трипсин (трипсинизация) и отделяне на клетки от откачване поединично да от хидродинамичните ефекти (суспендиране).

През първите инструментална големи клетки (мило, 1973), в който най-старите и мъртви култури (Бауман и сътр., 1975- Mitsui, Schneider, 1976). Освен това, в тези култури увеличи броя на клетъчните контакти, които не могат да бъдат унищожени при субкултивиране, без да се уврежда клетките се (Milo, 1973).

Ето защо, при условията на бавния растеж на културата на постоянно унищожаване на клетки в процеса на презасаждане впечатление за пълна лиза. В случаите, когато са изключени влиянието на презасяване операции, не не се наблюдава повишение в цената на клетъчната смърт от възрастта на културата.

Следователно, ограничени панкреас клетъчни култури изключително причинени намаляване на митотичния активност и без загуба на самите клетки. Освен това, има основание да се предположи, че това е намаляване на митотичния дейност е причина за повечето от морфологични и биохимични промени, наблюдавани в клетките на стари и мъртви растения.

Например, беше установено, че е описано в края на живота култура "дегенеративни" клетки, които придава голямо значение в ранните проучвания (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965), не предизвикват, в резултат на смъртта на културата, т. Е. Намаляване митотичен дейност. Установено е, че много от така наречените "дегенеративни промени" може да бъде получена в млада култура, потиснат в продължение на дълъг период от клетъчното делене.

Всички тези "дегенеративни промени" изчезват след няколко удвояване на населението, ако отново се създадат условия за растеж на растенията (Brunk и др., 1973). Увеличаването на размера на клетките в стареене култури също очевидно, причинени от забавяне и спиране на клетъчното делене. Всъщност се наблюдава увеличение в размер само в клетки, които не синтезират ДНК (Бауман и сътр., 1975).

Горните факти показват, че проблемът със застаряването на населението клетъчната култура по същество се свежда до изучаването на причините, механизмите и последиците от наблюдаваното намаление в митотичен дейност.

Този процес не е задължително да причини увреждане и стареене на клетките и може да бъде следствие от тяхната диференциация (Гаврилов, Гаврилова, 1978- Гаврилов, Yaguzhinskii, 1978), което често е придружено от намаляване на митотичния активност (Труман, 1976). Следователно, понятието "смърт", "смърт", "остаряване" и "продължителност на живота" на клетъчни култури са изключително условно, както и концепцията за "млад" и "стар" култура.

Тяхното използване комплекти от изследователите да изучават механизмите на разстройства и увреждания, въпреки че самото съществуване на тези травми и заболявания в клетъчна култура не е доказано, и не е установена тяхната роля за намаляване на митотичния дейност.

Поради това е препоръчително да се използват и други термини, които ще са се фокусирали вниманието на изследователите е върху това, което наистина се случва, това е. Д. На намаляване на митотичния дейност. вече са били въведени Такива условия.

Вместо това, понятията "живот", "остаряване", "смърт" и "смърт" се предлага да се използват термините "за деление на живота" клетъчна култура "за деление стареене", "смърт репликация" и "за деление на смъртта" на клетъчната култура.

Концепцията за "млад" и "стар" култура е също така в момента се използва с прилагателното "за деление". Младите (разделителни), наречени за деление, както и стари и мъртви (без разделяне) - postreplicative.

За краткост, стари концепции понякога са поставени в кавички, което подчертава им конвенция (Norwood и сътр., 1974- Гаврилов, Гаврилова, 1978). Показателно е, че дори и сега биологичната възраст на културата се определя от процента на клетки, които не са способни на репликация ДНК синтез (Cristofalo, Sharf, 1973 Бауман и сътр., 1975).

В момента тежестта установена следната основна проява на "остаряване" на клетъчни култури.

1. намалени пропорционално на клетки, способни на обмен (Merz, Ross, 1969 Cristofalo, Sharf, 1973).

2. Увеличаване на периода на митотичния цикъл. Radioautographic открива чрез увеличаване на минималния период на генериране на клетки в култивирани човешки фибробласти от 16 до 21-22 часа (Macieira-Coelho и сътр., 1966). Кинематографично изследване показва увеличаване на средното време между маркировките с "стареене" човешки фибробластни култури от 16.8 до 32 часа (Absher и сътр., 1974).

3. "стареене" клетъчни култури подобрени инхибиращия ефект на гъстотата на населението на скоростта на растеж (Macieira-Coelho и сътр., 1966- Absher и сътр., 1974- Schneider, Mitsui, 1976), така че плътността на насищане на репликация стари култури е приблизително 2 пъти по-малки от "млади" култури (Schneider, Mitsui, 1976).

Споделяне в социалните мрежи:

сроден