Тромбинът тест поколение

Този методологичен подход е предложен от британски учени през 1953 г. да се направи оценка на състоянието на системата на хемостаза в хемофилия. Трябва да се отбележи обаче, че предложеният метод в оригинал е много далеч от съвършенство, така че за дълго време, тя не е била дадена сериозно внимание. Вторият метод на раждане оцелява благодарение Hemker Конрад, който е направил множество подобрения в процедурата за анализ на 90-те години на миналия век. Най-важното модификация Hemker К. и др. е използването на flyuoro- и хромогенни субстрати за откриване на образуване на тромбин, което значително повишава възпроизводимостта на метода. В настоящото изпълнение, методът на тромбин, образуван по време на реакцията разрушава пептиден субстрат, който предизвиква освобождаването на молекула флуорофор. промяна интензитета на излъчването се открива чрез флуорометър на редовни интервали.

принцип на метода

Тестът се основава на поддържане на скоростта на хидролиза на пептидна връзка флуорогенен субстрат, специфичен за тромбин. Определяне на субстрат флуорометър скорост фрактура се извършва в ямките на 96-ямкова плака, в който сместа се инкубира PRP проба с коагулация активатор. Както използване активатор на рекомбинантен тъканен фактор реагент и калциев хлорид и стандартизиране и подобряване на скоростта на коагулация в тестовата система се добавят фосфолипиди. Проучването на кинетиката на образуване на тромбин ни позволява да се изчисли съотношението на просъсирващ антикоагулантни механизми.

Реактиви и оборудване

• Рекомбинантен човешки тъканен фактор (1 пикомола).
• Специфична тромбин флуорогенен субстрат.
• Буферният разтвор, съдържащ калциев хлорид.
• Калибратор с активността на човешки тромбин 580 нмола.
• Флуорометър.

Кръвните проби за изследвания

Както thromboelastogram запис проба използва BTP. Редица изследвания за отчитане на приноса на тромбоцитите в образуване на тромбин предлагаме да се използва богата на тромбоцити плазма. Тестът е силно чувствителен към дефекти и има предварително аналитична фаза на изследването.

Видео: лекция 29 - Тест поколение Методи

техниката производителност

процедура по разследване се извършва в съответствие с инструкциите за използване на оборудването и алгоритъма на компютърна програма, която изчислява на динамиката на основните показатели за образуване на тромбин.

Оценка на резултатите от изследването

Fluorogenic субстрат, специфичен за тромбин, така че промяната на интензитета на луминисценция след добавяне на коагулация активатор пропорционална на скоростта на генериране на този ключ коагулиращ ензим.

След калибриране стандартен размер на тромбин флуорометър позволява да се конструира крива на образуване на тромбин. Изследването оценява времето на забавяне на образуването на тромбин (време на закъснение), максималният размер на тромбин (връх тромбин), времето за достигане на максимална тромбин (ttPeak), както и ендогенния тромбин потенциал (ЕТР).

Тълкуване на резултатите от проучването

Тъй коагулационен фактор е ключов ензим в коагулационната хемостаза, тест тромбин поколение е ценен индикатор на интегралната кръвосъсирването.

Резултатите от тестовете зависят от начина на активиране на концентрацията на коагулация активатор, както и много други фактори, така че променящите се условия техника позволява да се адаптира към откриване на различни дефекти в хемостазната система. По този начин, добавянето на тромбомодулинов в тестова система, помага за разкриване на хиперкоагулиращо смени в мутации фон leydenovskoy. Изследване на образуване на тромбин в богата на тромбоцити плазма прави възможно откриването на дисфункция на тромбоцитите хемостаза Glantsmana тромбастения, синдром на Bernard-Soulier и др.

Най-често използваната активирането на коагулацията BTP тъканен фактор, който позволява да се оцени състоянието на коагулация. Това изпълнение при пациенти с хемофилия време и други коагулопатии мярка МИГ е удължен и ЕТР и връх тромбин намалява. Интензивността на тези промени в тези пациенти зависи от активността на коагулационни фактори VIII и IX.

Причини за възникване на грешки

Грешки preanalytical фаза на изследването, в т. Н. погрешно дозиране на цитрат в ограда от венозна кръв.

• Дефекти центрофугиране при получаване PRP проби.
• Свържи се с хепарин учи кръв от венозен катетър.
• Хемолиза.

Други методи за анализ

Понастоящем разработени други аналитични техники, които могат да визуализиране на процеса на коагулация, като например метода на запис на растежа пространствен съсирек и thromboelastography. Всички тези техники визуализират съсирването на кръвта и са в състояние да изчислят интегрални параметри на коагулацията, но тяхната диагностична специфичност е все още ниско.