VWF антиген: метод за определяне

На повърхността на пластмасовите ямки на плаката сорбира антитела срещу фактор на фон Вилебранд. В първия етап на научните изследвания в кладенеца на ямките се добавят BTP проби. VWF молекули са фиксирани на съответните антитела и остават свързани, когато промива. Във втория етап в кладенеца анализ за получаване на поликлонални антитела. На следващия етап от разследването в хромоген разтвор се прибавя. Това вещество е боядисан след ензимно смилане на. Интензивността на оцветяване е в зависимост от съдържанието на фактор на фон Вилебранд.

Имунологични метод за определяне на фактора на фон Вилебранд може да се осъществява чрез използване на ракета електрофореза.

Коефициентът на вариация ELISA за определяне на VWF: Ag е по-малко от 10%.

Видео: Определяне на кръвна група и Rh фактор

Реактиви и оборудване

• Концентрат на промивен буфер (рН 7.3).
• инкубационен буфер (PBS- рН 7.3).
• Лиофилизирани стандарти.
• Лиофилизирани контролни проби на ниски и високи нива.
• Конюгатът на поликлонални антитела.
• субстратен разтвор.
• Спрете решение.

Видео: кръв (кръвна група антигени, RH) [Това е проста]

Дистрибутор диагностичен комплект от реагенти - CJSC "BIOHIMMAK".

Кръвните проби за изследвания

За да изпълните фактор тест Вилебранд използването на тези партньорства.

техниката производителност

Изграждане на крива на калибриране. Освен това е необходимо да се изгради стандартна крива, като линейна координатна система. За конструиране на калибрационната крива използване на абсорбцията, получена чрез разреждане на пробата с известна концентрация на фактор на фон Вилебранд. На оста х се прилага към концентрациите на VWF: Ag в U / мл или процента (1 U / мл = 100%) и на оста у показва абсорбция. В тези случаи, в които има проби, чиято абсорбция стойност по-голяма от стойността на най-високата точка на калибриране, те трябва да се разреди с инкубационен буфер (1 + 1) и се тестват. Така получената концентрация на измерване трябва да бъде умножена с фактора на разреждане.

Оценка на резултатите от изследването

Концентрацията на VWF: Ag при здрави хора варира в широки граници. Правилник зависят от версията на диагностичен комплект, оборудване, кръв, реагенти, и много повече, така че няма общоприета нормални граници, когато се измерва този показател. нормални граници обикновено посочени в инструкциите на производителя на реактиви за определяне на фактора на фон Вилебранд, но много производители препоръчват, че всяка лаборатория да установи свой обхват от нормалните стойности. Важно е да се помни, че средните стойности на нивото на този протеин с съм кръвна група е около 10% по-ниски от тези на други пациенти, които винаги трябва да се разглеждат при диагностицирането на хеморагична болест.

Причини за възникване на грешки

• Липсата или неефективността на системата за вътрешен контрол на качеството. Наличните до момента проби от референтни материали, сертифицирани стойности с фактор на фон Вилебранд. Като се има предвид наличието на коренно различни методологични подходи за определяне на протеин, трябва внимателно да проверите версията на проучването, за което е било заверено пробата за изпитване.
• Неправилно доза от цитрат на ограда от венозна кръв. Липса на натриев цитрат поради ниската хематокрит и хемолиза доведе до грешки и не-възпроизводими резултати.
• Хемолиза.
• Увеличаването на VWF наблюдава при стресови ситуации по време на тренировка, бременност, кървене, хипертония, инфекциозни заболявания, естрогенна терапия. При жените в различни дни на менструалния цикъл може да е колебания в концентрацията на фактор на фон Вилебранд. За да се стандартизира хормонален влияние върху съдържанието на мултимерен протеин, някои експерти препоръчват да се диагностицира болест на фон Вилебранд при жените между 5-ти и 7-ми ден от менструалния цикъл.

Други методи за анализ

За съжаление, не съществува единна процедура, която може да се вземат под внимание всички за много варианти на този протеин аномалии, обаче за диагностика VWD е разработила набор от лабораторни изследвания. Основни изследователски методи, използвани за идентифициране недостатъци или качествено аномалия на фактор на фон Вилебранд, основани на използването на ензимни техники имунологичен анализ. Освен това, за диагностициране на заболяването ефективно проучване на функцията на агрегирането на тромбоцитите, лекувани с нормални ристоцетинов добавяне PRP изследвана. За целите на качествен диференциация разстройства молекула на този протеин допълнително заето и други методически подходи.

Определяне на ристоцетинов-кофактор активност на фактор на фон Вилебранд

Формалин третира тромбоцити губят способността да изпълнява много от функциите си, г. Н. единици образуването и функция в отговор на добавянето на най-известен функция индуктори агрегация, но с добавяне на ристоцетинов в смес от такива тромбоцити и плазма проучване те бързо аглутинира. В този тест система тежестта на аглутинация е в пряка зависимост от наличието на фактор на фон Вилебранд, но с намаляване на концентрацията на този протеин или неговото качество малоценност като аглутинация слабо изразено или липсва напълно. Има две възможности prinitsipialno подобна методология за определяне на ристоцетиновия-кофактор активност на фактор на фон Вилебранд. Произход - количествено, за прилагането му се изисква Агрегометър, второ - полуколичествено, като включва визуална оценка на времето на появата на аглутенати в смес разреждания на тест плазмата и ристоцетин третираните с формалин тромбоцитите. И двата метода имат коефициент на вариация по-малко от 10%.

Диагностични методи е необходимо да се разграничат различни версии на фон Вилебранд заболяване

Определяне на колаген-свързваща активност на фактора на фон Вилебранд. Адхезията на тромбоцитите към субендотелните колагенови влакна реализира чрез тромбоцитите рецептор GP-Ib / V / IX. Това взаимодействие изисква VWF като кофактор, така че при аномалии мултимерен протеин или негов недостатъчен капацитет нарушен тромбоцитите свързване към колаген рецептори. За определяне на колаген-свързващата активност изисква набор от реактиви и оборудване за извършване на ELISA. коефициент на вариация му не надвишава 15%.

Определяне на мултимерен фактор на фон Вилебранд. Модерен диференциална диагноза на повечето варианти на тип 2 VWD също се основава на изследването на мултимерен фактор на фон Вилебранд. За да се оцени способността на този протеин да образува мултимери все използване имунната електрофореза. Процедурата за определяне Многометричните доста сложно, изисква оборудване за имунната електрофореза, подходящ за извършване на специализирани лаборатории рутинно извършване на имунната електрофореза, диагностикуми за прилагането му не е така. Информация за чувствителността и специфичността на този диагностичен метод в съвременната литература не е представена, но има съобщения за неизвестни досега версии на мултимерен протеин, който някои експерти смятат за диагностични артефакти.

Определяне на тромбоцитната агрегация с ристоцетинов (R1PA). Нарушаването на агрегирането на тромбоцитите, индуцирано от ристоцетинов е често лаборатория Willebrand болест проявление. Това изпълнение за идентифициране на високо специфичен подтип 2В фон Вилебранд заболяване, при което е налице необичайно високо агрегация в отговор на добавянето на ниски концентрации на ристоцетинов. В други аномалии, този метод е само от второстепенно значение, тъй като е обичайно доза може да бъде разделена на различни изпълнения на тази патология. За изпълнение на тази техника изисква агрегация и ристоцетиновия. Възпроизводимост изследвания на агрегация с ристоцетиновия голяма степен зависи от модела на агрегация, опит и обучение на персонала.

Видео: Blood групировка от кръстосан огън и Rh фактор