Разработване и използване на методи за определяне на серотипа циркулиращи генотипове на вируса на хепатит С.

Вирус на хепатит С (TOS) се отнася до vozbuditelyams изключително изразена хетерогенност на населението. Установено е, че пациенти с хронична HS, свързани с различни genotipamivirusa, по различен начин реагират на вируса interferonoterapiyu.Opredeleniegenotipov HS-важно в епидемиологични проучвания, тъй като той позволява прехвърлянето на добре документирана патоген.

Целта на това изследване - да се направи оценка на серотипа vozmozhnostimetoda за определяне на генотипа ХС. Dlyaserotipirovaniya бе приет от оригиналния метод, opisannyygruppoy изследователи от Великобритания по P.Simmonds с указания (1993,1995). 12 къси пептиди (18-19 аминокиселини), които представляват епитопи на протеина NS4 6 генотипове ферма бяха poluchenymetodom синтез в твърда фаза, пречистване чрез хроматография и vysokoeffektivnoyzhidkostnoy използва като основа на имуноанализ immunosorbentadlya със серуми soderzhaschimiantitela да NS4 протеин (анти-NS4) , Наличието на анти-NS4 podtverzhdalosv ELISA със смес от пептиди за серотипа или чрез имуноблотинг (LiaTek HCV, Organon Teknika- Wellcozyme HCV Western Blot, Murex).

Определяща специфичността генотипове тежка razarabotannymvariantom серотипа проучен чрез сравняване на резултатите от "сляп" тест панел 154 серуми анти-NS4-pozitivnyhobraztsov с известните генотипове (с изключение на една проба) е определено като се използва процедурата, описана RFLP P.Pohjanpeltoet др. (1996) в Катедрата по вирусология, Университета на Хелзинки.

За изследване на разпространението на variantovvirusa GS в някои области на Русия (Санкт Петербург, Нижни Новгород, Уфа, Белгород) и съседните страни (Беларус, Казахстан, Грузия) от серотип бяха тествани анти-NS4-pozitivnyesyvorotki, получена от 474 души, включително 157 кръводарители 237 пациенти с хепатит с, и 80 души в риск (vnutrivennyenarkomany, пациенти с рак, пациенти hronicheskogogemodializa центрове, болници и други туберкулоза.).

Резултатите от "слепи" изпитване 154 syvorotoks известни генотипове на вируса на хепатит С чрез RFLP представени таблица №1. Като цяло serotipirovano 148 проби (96.1%). Polnoesovpadenie серен- и генотипове наблюдавани при 130 от 148 серуми (87.8%). За индивидуални генотипове тази цифра е razlichnym.Naibolshaya честота съвпадение на резултатите, наблюдавани за HCV-1 - (92.5%) с разсейване индекс от 87.1% за серуми subtipa1v до 100% за серуми със смесени подтипове 1а + 1v- за HCV- 3- 94.3% (всички серум третира подтип 3а). -Малък резултати protsentsovpadeniya наблюдавани при изпитването на серуми на RFLP принадлежащи към HCV-генотип 2 (80%). Когато 5 serotipirovaniibylo открива серуми, които могат да бъдат приписани на genotipuHCV-4. Въпреки това, когато се сравняват резултатите с sovpadenieotmecheno RFLP данни само две проби (40%).

резултатите от откриването висока корелация genotipovvirusa GS получи две напълно различни методи за изучаване pozvolilaispolzovat серотип циркулиращи GS variantovvirusa в отделни територии. Резултатите от тази част issledovaniysummirovany в Таблица №2. Като цяло, всички изследваните territoriyahvyyavlena циркулация 3 генотипове ХС в единична sluchayahv четири зони, очертани HCV генотип-4. Най-често opredelyalsyagenotip HCV-1 (от 47.1% в серум от Грузия до 74.4% - от Беларус) .Vtoroe място класиране в разкриваемостта на всички територии, заети prakticheskina HCV-генотип 3 (15.5% в серум от Belorussiido 34.0% - от Нижни Новгород). Много по-малко проучени syvorotkisoderzhali от конкретен тип анти-HCV NS4-2. Максимална chastotavyyavleniya този генотип е бил инсталиран в серума на Беларус (12.7%), Казахстан (13.7%), а минимумът - в серумите от Санкт Петербург (3.8%). В 35 серуми от всички региони проучени, с серотипа за установено наличието на анти-NS4 различни генотипове (генотипи смесени). Най-голям дял на серуми от smeshannymigenotipami проби, направени в които и двете opredelyalisHCV-1 и HCV-3 (26 от 35 - 74.3%), т.е. най-често vstrechayuschiesyagenotipy. Други варианти комбинации изпълнени znachitelnorezhe - HCV-1 + HCV-2 (8,6%), HCV-2 + HCV-3 (11.4%). HCV-1 + HCV-4 в комбинация разкрива две серуми от Джорджия (5.7%).

Материали от това проучване svidetelstvuyuto, че използването на синтетични пептиди, sootvetstvuyuschihantigennym Детерминанти на не-структурен протеин NS4, в kachestveosnovnogo компонент имуносорбитен ELISA позволява uspeshnoopredelyat генотипове на вируса в серума на заразените ферма etimvozbuditelem хора и наблюдение региони обръщение genovariantovvozbuditelya.

За да се определи генотипа като тежки ispolzovanmetod PCR-RFLP с тип-специфични ограничения fermentamiBst U1 и Bst N1 и последващия анализ на рестрикционни продукти с помощта на хоризонтална електрофореза с 3% агарозен гел (ThiersV. И сътр., 1997). Този метод се тества серуми на пациенти с хронични krovi15 GS получаващи интерферон. RNKvirusa GS открива в 14 проби, докато в 6 случаи (42.9%), монтиран subgenotip 3а, 3 (21.4%) - 1 gentip (2- subgenotip1v 1 - subgenotip 1а). GS РНК вирус, изолиран от 4 до obraztsovotnosilas рядко откриваеми патогени генотипи - 4/5. Poslednienahodki изискват по-нататъшно разглеждане.

Таблица 1. SOPOSTAVLENIE PEZULTATOV OPPEDELENIYAGENOTIPOV VIPUSA GEPATITA С METODAMI RFLP и SEPOTIPIPOVANIYA

PPIMECHANIE: * - не tipipovalos ** - abs.chislo / процент;

Таблица 2. CHASTOTA ОТКРИВАНЕ PAZLICHNYH GENOTIPOVVIPUSA GEPATITA с методи SEPOTIPIPOVANIYA HA OTDELNYHTEPPITOPIYAH Possii И SOPPEDELNYH STPANAH

PPIMECHANIE: * - abs.chislo syvopotok с dannym генотип /% (100 НС с syvopotok ukazannoy teppitopii)

Литература:

1. 1.Pohjanpelto P., Lappalainen М., Widell A. et al.// Clin.Diagn.Virol.-1996. -Vol.7. -Р. 7-16
2. 2.Simmonds P., Holmes Е.С., Cha Т.А. et al.// J.Gen.Virol.-1993-Vol.74.-P. 2391 -2399