Хибридизацията на иРНК и ДНК антитела. Локализация v- и гени в генома на имуноглобулини

В експерименти върху хибридизация различни иРНК и ДНК, особено в началото обикновено се получава двуфазна крива с преходната зона в една област и втора ниско - при високи стойности на Cot4l.

Използвайте за потисничество хибридизация тРНК небелязан, кодираща L-верига на хомоложни или хетероложни С-региони вече оставя да се установи, че високите стойности поради хибридизация Cotih C ген и, че броят на тези гени не надвишава 2-4 на хаплоиден геном. Наличието на областта с ниски стойности Coth част изследователи считат за доказателства за значителен брой "зародишни» V-гени. Обаче, повишаване на чистотата на препарати иРНК и използването на иРНК фрагменти, съдържащи и полиА последователност показва, че V-гени също са уникални, и че те са представени в генома в количество не надвишават две или три копия в последните години.

Помислете например данните за хибридизационни експерименти върху иРНК, кодираща синтеза на ламбда-L-верига на миши миелом МОРС 104Е с ДНК от черен дроб myshn (Matthyssens напр. с., 1976). Въз основа на данни за първичната структура на V-регионите на всички понастоящем изследва ламбда верига мишки (18 проби), разделени на седем подгрупи. Ако за всяка V-област има специална V-ген, трябва да се открива 7 V-гени в генома на мишката. В действителност броят им не може да бъде по-малко от 145 (при това условие, вероятността на откриване на седем различни подгрупи в изследването общо 18 проби се увеличава до 90% - при 50% вероятност на броя на V-ген трябва да бъде най-малко 25). хибридизацията се определя от кривата, че V-гена за L-верига МОРС 104Е се повтаря в генома на не повече от 2-3 пъти. В същото време, степента на хомология на две иРНК, кодираща синтеза на две ламбда вериги, дори принадлежащи към две различни подгрупи (МОРС 104Е и Nors 2020), много големи. Екстраполирането на тези данни с останалата част на тРНК, кодираща ламбда верига, може да се заключи, че с това сходство между V-домени на тези вериги L-иРНК МОРС 104Е ще има gnbridizovatsya с всички тях и, следователно, стойностите Cot трябва да бъде значително по-ниски, отколкото е определено в експеримент (повече повторения, толкова по-ниска стойност Cot ,,,). Тези данни предполагат, следователно срещу присъствието в генома на голям брой на V-гена и следователно в полза на соматична мутация, както е основният фактор, осигуряване на разнообразие от антитела (имуноглобулини).

Следва обаче да се отбележи, че метод хибридизация Това е доста сложна и, както изглежда, не позволява да се направи ясно интерпретирането на резултатите. По този начин, за разлика от експериментите, описани по-горе, като се използва кДНК на V-и С-домени в отделно (сДНК и kDPKs) е намерено хибридизация kDNKu висока специфичност към иРНК (Smith, 1977 г. Stavnezer, Bishop, 1977). Установено е, че докато kDNKs еднакво хибридизира с всички тРНК кодираща типа на L-верига капа kDNKu реагира само с капа хомоложна иРНК. Това показва, че броят на V-гена се определя чрез хибридизация може да се подценява.

В същото време, методът хибридизация Тя се оказа много полезна за изследване на локализацията на V-и С-гени в клетъчния геном. Неотдавна, този метод е в състояние да докаже соматични реорганизация на гените, кодиращи V- и С-област на имуноглобулин. Показано е, че в ембрионален миши геном V- и С-gsny отделя, докато в тумора (плазмен нита МОРС 321, Nors 2020), те са разположени в близост (слят).

криви мРНК се хибридизира към ДНК, получени от чернодробните клетки и миелома, са почти идентични. Това означава, че в клетки, произвеждащи имуноглобулини, няма амплификация на гените, които ги кодират.

По този начин, в момента намерено, геном, който има 2 или 3 на гена, кодиращ V-региона на ламбда вериги, 2 или 3 от ген, кодиращ V-региона на веригата на капа и 2-4 на гена, кодиращ регион С на L-вериги.

Първо, това е Съединение V-и С-гени, След това тази част от ДНК плюс 200-450 нетранслирани нуклеотиди транскрибирани в мРНК, която след присъединяването до края 200 3`-поли нуклеотидна транспортира до цитоплазмата и е включена в polyribosomes, която кодира синтезата на прекурсори на полипептидните вериги на имуноглобулини.

След разцепване на прекурсора ekstrapeptidov (И може би преди) започва монтаж на имуноглобулинови молекули, като ги прехвърля в микрозомни везикули и или секреция или включване в клетъчната мембрана.