ИРНК участва в синтеза на антитяло. Методи за изучаване на иРНК

В момента Два подхода - химически и имунохимичен. Първата се основава химически фракциониране на иРНК, изолирана от клетки, произвеждащи имуноглобулини. Основните етапи са: избор на mislomnyh клетъчни или микрозомални мембранно-свързани polyribosomes (Stavnezer д, 1971 Milstein и д 1972 ....) - екстракция на РНК от тях при условия, които им позволяват градиент degradatsiyu- РНК фракциониране плътност saharozy- подбор фракции, съответстващи на размера на предвиденото пречистване иРНК чрез колонна рибозомна РНК с олиго ((1T) - или поли (U) целулоза (или сефароза), само богат забавянето adennlovymi бази иРНК (полиА mRPK), и изследване на биологичното дейността посветен IP акции.

В някои случаи, по-нататъшно пречистване иРНК препарати употребяван polnakrplamidnom гел електрофореза в присъствието на 99% формамид (Farace напр. с., 1976 г. Matthyssens е. с., 1976). С тези или други варианти на горната схема се използват в момента от преобладаващата част от изследователите. Добив индивидуален полиА РНК обикновено е 0.01% от размера на РНК въведени (Brownlee напр. A., 1973). В резултат на това, понастоящем разпределени NZ плазмоцитоми МОРС 70E, МОРС 21, 41 МОРС няколко иРНК, кодираща както на Н и L верига. Чистотата на по-голямата част от тези лекарства не надвишава 40-60%.

Само една група автори наскоро успя по такъв начин да се получи иРНК с повече от 90% чистота (Matthyssens напр. с., 1976). Това не е изненадващо. Използваният метод се основава на първо място на отделянето на РНК молекули съгласно тяхното молекулно тегло и, от друга страна, в отдела от населението полива съдържащи РНК лишени от него.

Естествено, клетките могат представя редица иРНК с подобни свойства, които не са свързани с имуноглобулини. Всичко това неизбежно ще замърсят препарати РНК на отделните имуноглобулин РНК. Очевидно е, че ще бъде по-голям или по-малък или, в зависимост от относителната пропорция на имуноглобулин синтезира от клетки на тези примеси.

Ето защо, за изолиране на иРНК на миеломи, синтез имуноглобулин, в който 30-40% от синтеза на всички протеини като цяло, този метод може да бъде ispolzovan- едновременно за изолиране на иРНК, кодираща синтеза на имуноглобулин от нормалните лимфоидни тъкани, особено на силно хетерогенна клетъчен състав на далака то очевидно е неподходящо.

много по- перспектива, От наша гледна точка, това е имунохимикали подход за решаване на този проблем. Предимството му се крие във факта, че вече първата стъпка от фракциониране включва строго специфични индивидуални polyribosomes селекция с помощта на антитела към протеина синтезира от тези polyribosomes. Има три варианта на този метод. Произход - отлагане polyribosomes антитела към протеина, синтезиран в присъствието на носител, т.е. същия протеин (съутаяване) .... (Delovitch и Е, 1972- Ласков, Mitelman, 1975).

Второ - обработка polyribosomes антитела към протеина синтезира от тях и утаяване на получения комплекс антисерум към антитела (непряка утаяване) (Schechtcr, 1973, 1974a). А третият - извличане на отделните polyribosomes чрез immunosorbents съдържащи ковалентно или не-ковалентно свързан антитяло синтезира по polyribosomes протеин (Сидоров и др, 1973 Sidorova с, 1974- Lubimova и др, 1975 ....). От така получения отделните polyribosomes или друг начин polysomal РНК се екстрахира иРНК и се отстранява чрез прекарване на сместа през колона с олиго- или поли (U) целулоза. Използване на имунохимичен подход успя получаване на иРНК препарати приблизително 95% чистота.