Имуноглобулин реактивност. Методът на спин-белязан хаптени

Hsia и Little (Hsia, Little, 1973) изследва взаимодействието на две спин-белязан хаптени - DNP хидразон производно на N-1-оксил-2,2,5,5-тетраметил-3-пиролидинон (I) и М-1- (оксил-2,2,5,5-тетраметил-3-метиламино) 2 4-динитробензен (II) с две mislomnymi IgA - МОРС 315 и 460 като метод на EPR, и за намаляване на квантов добив на флуоресценция на протеина.

Установено, че от подвързване хаптени I и II протеин МОРС 315 N-О-група, в двата случая са силно имобилизирано състояние, но два вида имобилизиран компонент се наблюдават в ESR спектърът на съединението II за разлика от обхвата на съединения I. При свързване към протеин МОРС 460 свободата на въртене N-О група на съединение I също значително ограничено, докато група съединение въртене-N-О II свързване към този протеин има малък ефект.

Въпреки това, ако се съди по близо намаляване на квантов добив флуоресценция на свързващ протеин спин-белязан хаптени и термодинамиката на изследването на този метод, афинитетът на съединенията I и II протеини МОРС 315 и 460 се различава леко. Следователно степента на обездвижване N-О група спин-белязан хаптен не във всички случаи характеризира силата на комплекса.

Според авторите, разликите в обездвижване съединения I и II могат да бъдат причинени от две причини: 1) лиганди се свързват към различни места конформационно твърд активен сайт, 2) конформацията на активното място може да бъде стабилизиран в различна степен в зависимост от различията в структурата на лигандите.

В други Ние изследвахме причините, причинява появата на два вида имобилизиран компонент в ESR спектър на комплекс II протеин МОРС на 315. Установено е, че това се дължи на две форми enantomernymi спин-белязан хаптен II. N-О група образуват лиганд с маркирана по-малко хидрофобни микросреда, а втората - по-хидрофобен, което води до различна позиция на имобилизирания компонент на оста на магнитното напрегнатостта на полето. Свързващите разделени форми enantomernyh (спин-белязан амини - DNP) протеин МОРС 315 (в резултат на появата на само един тип компонент.

Методът на спин-белязан хаптени

Заместване на спин-белязан хаптени в активните места на антитела хомоложна хаптен Е са използвани Leutom и членове (Leute напр. с., 1972), за да се определи концентрацията на морфин в разтвора за изпитване. Този метод използва ефекта на силно увеличение на височината на EPR линии на спектъра на спин-белязан морфин в прехода от имобилизирано състояние на свободните в резултат на изместване на активния център. Височина на тесни линии дезинхибирано EPR характерен спектър в тази концентрация случай морфин в разтвора за изпитване.

Долната граница на чувствителност такъв метод 10 7М морфин а (0.03 мг / мл). Освен това, този подход е разработен (Montgomery напр. A., 1975) и се използва за определяне на концентрацията на редица лекарства в серум. Той се оказа 100 (пъти по-чувствителни в сравнение с конвенционалните химически метод и притежава висока специфичност. За един определяне сравнително 50 мкл серум.

Hsia и колеги използва комплекс DNF - метилен (N-1-оксил-2,2,5,5, тетраметил-3-метил-аминопиролидин-2,4-динитробензен) с миелома IgA (МОРС 315) като моделна система за изучаване кръстосана реактивност на протеина по отношение на DFT и неговите аналози. От количеството на свободните, активни центрове разселени от спин-белязан хаптен се съди по интензитета на EPR компоненти спектър vysokopolyyuy. Количествени оценки, получени по този метод, са в добро съгласие с резултатите от равновесие диализа. Предложеният метод е много обещаващо в иму проучвания.
се направят следните изводи за структурата на активния център на антитела може да се направи въз основа на данните, получени.