Утайката имунни комплекси. Взаимодействие домени на антитяло вериги

състояние агрегиране на имунни комплекси не трябва да се намесва с фиксиране Fc-фрагмент на компонента на комплемента, и следователно тяхното разпространение в утайката. Изследване на структурата на специфични утайка антитела с антигени се провежда чрез спин етикети (Grigoryan и сътр., 1969). За етикетиране протеин използване нитроксилно радикал синтезиран въз основа на малеимид. Това ковалентно реагира с SH-групи заешко антитяло след редукция с 2-меркаптоетанол междуверижна дисулфидни връзки. Когато се запази тази дейност антитяло.

В резултат на това утаяване спин-белязани антитела яйчен етикет продължиха да се въртят свободно, без да имат пространствено препятствие. От друга страна, неспецифично отлагане на спин-маркирани антитела с амониев сулфат доведе до силни имобилизация маркери. Тези данни сочат към мрежа, рохкава структура на образуваната утайка имунни комплекси.

В експерименти с помощта на метод Кръгов дихроизъм разлики са открити в спектрите на три хомоложни antipnevmokokkovyh антитела преди и след тяхното взаимодействие със специфични лиганди-geksasaharidny (Jaton напр. с., 1975a). Изследвахме промените в спектрите на хомоложни рекомбинанти и хибридни Н и L вериги чрез действието на хаптен. Хомоложни рекомбинантни антитела имат спектър идентичен на спектъра на нативния антитяло, въпреки липсата на между верижни S-S-връзки.

Промени в спектрите възникне при свързване на хаптен във всички три от нативни антитела, Fab-фрагменти и хомоложни рекомбинантни молекули. Въпреки това, няма доказателства за конформационни промени при взаимодействие на хаптен с getsrologichnymi рекомбинантни антитела. Тези резултати се потвърждават от промяната на флуоресценцията квантов добив на антитела. Те посочват високата специфичност на междуверижно взаимодействия в имуноглобулини.

уникална информация на взаимодействие домейн във веригите могат да бъдат получени от спин маркер. Тази информация зависи от неговия протеин свързващ сайт. съответната аминокиселина остатък (или остатъци), към който свързване възниква етикета се определя от неговата химична структура и етикетиране условия (например, рН). В работата (Kaivarainen, Nezlin, 1967a) протеини, маркирани с две iminoxyl радикали: 2,2,6,6-тетраметил-4-амино- (N-dichlorotriazine) - R, и imidozolidom (2,2,5,5-тетраметил -1-oksilpirollin-4-карбоксилна киселина) - R2. В зависимост от условията на марка за присъединяване те биха могли да общуват с лизин или хистидин.

В EPR спектър на етикети R, и R2 конюгиран вероятно дали списания остатъци на протеини се състоят от три тесни линии характеристика на слабо immobizirovannoy етикети без да изпитват Steri-радикално възпрепятствано от макромолекулата. За разлика от тези спектри EPR спектри на имуноглобулин G, белязан от R, (вероятно присъединяването хистидинови остатъци) се състои от пет компонента.
такъв спектри посочи способността на етикета, за да бъде в две различни микросреда - А и Б, които се различават по microviscosity.

Сходството на EPR спектрите IgG и различни субединици са очевидно причинени общи за всички тези структурни елементи, а именно, домени, и тяхното взаимодействие. Това предположение се потвърждава от факта, че протеолиза на изолирани домени L-верига А-компонент на спектъра, съответстващи на етикета на имобилизирания, напълно изчезват. Важно е да се отбележи, че според физикохимични и имунохимични методи половина L-вериги (домени) запазват основната пространствена структура присъщи на тях в състава на интактни L-вериги.

В експерименти върху взаимодействие спин-белязан Rt хистидинови остатъци на антителата с антигени, изолирани, използвайки заешко анти-човешко антитяло хемоглобин, IgG анти-говежди и магарешки анти-човешки LGG. Съгласно нашите експериментални етикети спин са свързани главно с Fab-фрагменти. Моделът на промени на EPR спектрите на спин-маркирани антитела чрез взаимодействие с антигени не зависи от това дали или не се образува утайка.

Във всички случаи, учи, комплексообразуване спин-маркирани антитела с антигените доведе до увеличение на съотношението на площта на А-компонент в областта на централната компонент спрямо контрола ESR спектър. Освен това имаше A-компонент смяна съответно увеличение на обездвижване тагове в А държавата. От областта на А-компонент се определя от размера на етикет в това състояние, неговата увеличаване посредством увеличаване на размера на етикет в състояние или увеличаването на живота на това състояние.