Стабилизиране на имуноглобулини хаптени. Зависимостта на конформацията на антитялото на температурата

Има данни от различни методи, сочи за увеличаване на стабилността на антитела и техните Fab-фрагменти, получени от комплексообразуване с хаптени. Например, добавянето на тези увеличава стабилността на хаптен молекули да denatiruyuschemu действие на гуанидин хидрохлорид (Cathou, Werner, 1970) и на действието на химотрипсин (Grossberg напр. A., 1965).

IgM антитела също се стабилизира специфични хаптени по отношение на протеолиза с субтилизин и химотрипсин (Ashman, Metzger, 1971). Доказано е, че понижаването на чувствителността на атака от протеази IgM напълно поради промяна на свойства Fab-фрагменти. Според нашия модел, той измества равновесието хаптен компонент А и Б Fab-фрагмент наляво.

Следователно, за да се обясни цитирано достатъчно, за да позволи на горните резултати, че свободната енергия е по-компактен конформер ниска свободна енергия конформер Б (т. е. А-конформер стабилен от В). Ако е така, тогава увеличаване на стабилността на протеина не трябва да зависи от това как съответното равновесие смяна причинил.

Всъщност, това е доказано, че промяната А салдо спин-белязан димери на леки вериги, симулиращи структурата на Fab-субединици чрез действието на 1,2 М натриев хлорид и 0,75 М (NH4) AS04 увеличава тяхната стабилност по отношение на температура. Подобно изместване на равновесието между А и В конформери причинява друг нарушаваща структура на протеина и неговите хидратация черупки агенти, такива като натриев додецилсулфат и температура.

зависимост структурен държавен IgG температурата открива чрез други методи. Например, G. Troitskii и сътрудници (1971) и J. F. Kiryuhin и сътрудници (1972) по оптичен въртящ дисперсия наблюдавани обратими рН-зависими конформационни промени в температурата преход от 27 ° до 38 °. След това беше показано, че в неутрално рН интервала от температурата на преход не зависи от изоелектричната точка на IgG.

Въпреки това, когато рН, отдалечена от изоелектричната точка, когато молекулата IgG става достатъчно голям собствен заряд, температурата конформационни преходи са напълно отсъства (Троицки напр. с., 1973). В VP Zavyalova и персонала (Zavyalov напр. A., 1975) провежда многостранен протеин конформация изследвания миелома като функция на рН и температура от оптично въртящ дисперсия, кръгов дихроизъм спектроскопия тревожно, електрохимична йодиране и диференциална сканираща калориметрия.

Установено е, че когато рН се променя от 6,0 до 6,5 наличност хромофорни групи понижения разтворител. Това може да се дължи на промени в броя на заредените групи в протеин и намаляване на междумолекулните електростатични сили на отблъскване. Подобно явление - екраниране част тирозин и триптофан остатъци (рН 7,35- 0,01 М фосфатен буфер) -nablyudali с повишаване на температурата от 25 до 35 ° С. Това се случва при свързване на хаптен динитрофенил хомоложна заешко антитяло (IgG).

Тези резултати могат да се считат като индикатор за това, че повишаване на температурата и образуването на специфични комплекси с хаптени увеличава тяхната компактност, което е в съответствие с редица трудове, цитирани по-горе.