Диагностика на стероидни хормони. методи

Видео: Съвременни методи за диагностика и лечение на заболявания на черния дроб

За да се измери точно малък концентрации на стероидни хормони и техните метаболити метод имуноанализ, използвайки конкурентно инхибиране имунопреципитация, или радиоимунологични (RIA), който за първи път е описан от Berson и Yalow през 1960 .. Въпреки това, по-нататъшното развитие на тази техника учени са изправени пред някои трудности. Първо, стероиди, неимуногенен и имат сходна структура - циклопентан-хаптен ядро ​​с леки отклонения, което прави трудно получаването на специфични антитела.

стероиди Това може да се направи имуногенен, да се присъединят към тях хаптен протеинов носител, и нивата на антителата може да се увеличи преди имунизация хаптени на. Въпреки стероид част, към който е конюгиран протеин има значително влияние върху специфичност на антитела, продуцирани. По този начин, антитела, генерирани по време на конюгиране говежди серумен албумин в позиция 19, показват по-висока специфичност в сравнение с разпоредбите на 3 или 17. За по-точно тълкуване на клинично необходимо да има данни за кръстосана реактивност на всяко антитяло, избрано за този анализ.
най-много фирми - производители на реагенти да предоставят данни за тяхната кръстосана реактивност на антитела, но те не винаги са надеждни и трябва да бъдат сверени че лабораторията, която ще извършва анализа.

На второ място, висок афинитет протеини, намерени в серума, като SHBG, се конкурират с антителата, и по този начин създаване на шум за определяне на броя на молекулите на стероид чрез RIA. Това води до трудности за измерване и изисква предварителното извличане на стероида с органични разтворители и често хроматографското разделяне. В същото време, някои химикали, като например 8-anilinonaftalensulfonat, са способни да инхибират свързването стероидни протеини, което позволява да се измери концентрацията на стероид директно, без преди екстракцията.

Видео: Съвременните безвредни методи за диагностика на болестта шап и гръбнака ortopedicheskoym център "Джулиана"

Директен анализ Това отнема малко време и могат да бъдат автоматизирани. В търговската мрежа автоматични устройства за определяне на концентрацията на естрадиол, прогестерон и тестостерон, които се използват в много лаборатории. Такива анализи, обаче, се характеризират с ниска чувствителност, и за определяне на минималната концентрация - ниска надеждност. В тази връзка, те не се препоръчва за употреба при определянето на изключително малки концентрации на хормони, такива като естрадиол при деца и мъже (<100 пг/мл), тестостерона у детей и женщин (<1,5 нг/мл) [64] и прогестерона во время стимуляции яичников (<1 нг/ мл).

проблем може да бъде решен чрез екстрахиране серум хексан (обемно съотношение 3: 2), последвано от неговото изсушаване и намаляване на серумния bessteroidnoy, който след това се подлага на анализ на автоматичен блок.

приложение газова хроматография в комбинация с масова спектрометрия (GC / MS) преодолява много от недостатъците на имуноанализ и се счита за по-надежден и точен метод. Въпреки това, GC / MS се извършва на няколко етапа, включително екстракция с разтворител, хроматографско разделяне и химически интерпретация, която предхожда инструментален анализ и чувствителността на GC / MS често е по-ниска от тази на някои видове имуноанализ. Неотдавна, тази техника се измества чрез течна хроматография в комбинация с тандемна мас спектрометрия (LC / TMS), характеризиращ се с по-висока чувствителност и производителност в сравнение с GC / MS.

Сега, този нов технология счита за база за сравнение. LC / TMS се използва за едновременно измерване на естрадиол и естрон нива в човешка кръвна плазма без кръстосана реактивност. Тези техники могат да бъдат препоръчани като отправна точка и да се използват за стандартизация и за имунологично одобрение проучвания, които предоставят необходимите клинични нужди за простота и висока производителност.