Критерии за качество за имунологично хормони

Или метод трябва да бъдат конкретни, чувствителен, точна и имат добра възпроизводимост. В допълнение, методът за анализ трябва да бъдат разработени така, че е възможно да се измери нивото на хормон в серум и кръв и плазма, а понякога и в урината и слюнката (в случая, например, стероиди). Друг важен критерий - минималния брой и максимална лекота на работа, за да се извършва от персонала на лабораторията. Всички тези критерии са проектирани до последния детайл до края на 1960 г. Тъй като ние ще направи няколко забележки и коментари.

специфичност

Това е най-важният показател за качеството на всеки метод, имунологичен тест. Специфичността може да бъде определен като способността на метода за откриване само специфична проба (аналит) вещество и не открива никакви чужди вещества, дори много сходни по структура с него. С други думи, специфичност - способността на метода да се даде минимален брой фалшиви положителни резултати. Специфичността на имуноанализът се определя главно специфичността на първичните антитела. Тя трябва да бъде особено висока, когато хормони проучвания с идентични или сходни антигенни детерминанти. Например, adenogipofizarnye хормони FSH, LH, TSH и ЧХГ се състои от две полипептидни вериги - аир, където верига са идентични. Ако анализът на всеки от тези хормони, като FSH, като първични антитела, използвани nizkospetsifichnuyu поликлонален антисерум, повечето от антителата се свързва с а-вериги от всичките четири хормони, така че резултатът от измерването е фалшиво положителен. Това явление се нарича кръстосана реактивност. Кръстосана реактивност се наблюдава при измерване на пролактин, който принадлежи към същото семейство с растежен хормон и плацентен лактоген (всички тези хормони са много сходни N-терминална аминокиселинна последователност).

Специфичността на поликлонални първични антитела могат да бъдат повдигнати от имуноадсорбция колона антисеруми със съответните антигени. Този подход е широко използван преди появата на хибридомна технология. В момента като първично антитяло е почти винаги се използва високо специфични моноклонални антитела, които се свързват към антигенни детерминанти са уникални за този хормон.

Специфичността на имунохимичен анализ зависи не само от свойствата на първичното антитяло, но също така и от много други, понякога непредвидими фактори. По-специално, специфичността може да се намали поради кръстосана реакция с първични антитела, някои неизвестни компонент в проба от серум или плазма. Има моменти, когато някои от промените, според структурата на суроватъчен протеин и поради това той става антигенен прилика с анализираната хормон. Накрая, серумни компоненти могат да бъдат въведени в активните места на първичното антитяло и намаляване на специфичността на тяхното свързване с антиген. Технологията на имунологичен тест, има много начини да се предотврати кръстосани реакции, обаче, могат да бъдат предвидени всички изненадите.

Видео: Живея здравословно! Лечение на мъжкото безплодие

Повечето системи имунохимични тест, предназначен за измерване на нива на хормони в някои човешки телесни течности (серум, плазма, урина, слюнка). Съответно, специфичността на системи за изпитване, установена за тези биологични течности. Ако се използват такива тестови системи за ин витро анализ на хормони, като след инкубиране на ендокринни клетки в буферен разтвор на Krebs или Рингер или във всяка културална среда, е необходимо да се провери тяхната специфичност особено в такива "анормални" условия.

чувствителност

Чувствителността на имунохимичен анализ може да бъде определена като минималната концентрация на вещество, което може да бъде измерена по този метод. За да се оцени чувствителността се използва стандартна проба с известна концентрация на хормон или друг антиген. Тази проба се получава чрез серийни разреждания на проби с намаляващи концентрации на хормоните. Така, чувствителността на тестовата система е директно пропорционална на степента на разреждане на стандартната проба, с която е възможно да се получи точен резултат от измерването. Чувствителността на имунохимичен тестовата система зависи преди всичко от афинитета на първичните антитела, които се използват в него. Освен това, чувствителността зависи от вида на имуноанализ, за ​​която е предназначена тестовата система. Обикновено, чувствителни тестови системи, базирани на RIA е по-висока от базирани системи за изпитване анализ immunohemilyuminestsentnogo и ELISA.

Видео: Какво е храна? 5 критерии. Сурова храна, fruktoedenie

За да се оцени чувствителността се използва стандартна проба с известна концентрация на хормон или друг антиген. Тази проба се получава чрез серийни разреждания на проби с намаляващи концентрации на хормоните. Така, чувствителността на тестовата система е директно пропорционална на степента на разреждане на стандартната проба, с която е възможно да се получи точен резултат от измерването.

Чувствителността на имунохимичен тестовата система трябва да бъде такава, че да може да се използва за измерване на нивата на хормоните се намира не само в нормалното му обхват от концентрации, но също така и под този диапазон. Затова на системи за изпитване на дизайнерите се стремят да постигнат чувствителността между 3-ти и 5-ти процентил или стандартите за в интервала между две и три стандартни отклонения от долната граница на нормата. Например, обхвата на нормални концентрации на LH при жени е 1,1-77 IU / L (2,3 162 пикомола / L). Следователно, чувствителността на тестовата система за измерване на LH трябва да бъде около 0.4 IU / L (0.84 рмола / L). Тази висока чувствителност е особено важно, когато е необходимо да се измери ниски концентрации на LH, по-специално за диференциална диагноза на първична аменорея. В тази ситуация, LH нива под 10 IU / L показват средно (хипогонадотропен) хипогонадизъм, докато високи нива - с първичен хипогонадизъм. Immunochemical система за изпитване трябва да е с висока чувствителност и в случаите, когато искате да се уловят и най-малката промяна в концентрацията на хормона. Най-често този проблем възниква при планиране и оценка на ефективността на хормоно-заместителна терапия. Например, при лечението на хипотиреоидизъм доза левотироксин избран измервания TSH. Обикновено ниво TTG варира между 0.4 и 4 MIU / L (2,9-29 пикомола / л). докато съвременни системи за изпитване за измерване на TSH имат чувствителност по-добре от 0.01 MU / L (0,073 пикомола / л). Повторни силно чувствителни измервания TSH позволяват ендокринолог много точно регулиране на дозата на левотироксин.

Чувствителността на тестовата система зависи главно върху афинитета на първичните антитела, които се използват в него. Освен това, чувствителността зависи от вида на имуноанализ, на която е разработена система за изпитване (RIA immunohemilyuminestsentny анализ, ELISA). Чувствителността на RIA и immunohemilyuminestsentnogo анализ обикновено по-висока от чувствителността на ELISA, като през първите два метода на имунохимични реакции се проведе в течна фаза, при което антигенни детерминанти на хормони са станали по-достъпни за първични антитела. Въпреки това, за изследователски цели и са направени много чувствителна система за изпитване на базата на ELISA.

точност

Тази степен на близост на резултата от измерване на концентрацията на хормона на истинската му стойност. Точност зависи от чувствителността и систематична грешка в метода: по-голяма чувствителност и по-малката грешка, толкова по-голяма точност. Точността на имунохимични системи за изпитване се оценява чрез измерване на концентрацията на хормона в стандартни проби.

възпроизводимост

Този метод способност имунохимичен анализ дава подобни резултати възможно с многократни измервания концентрация хормон в една и съща проба при различни условия (по различно време, в различни лаборатории). За да се оцени възпроизводимост се използва като стандартни проби, получени от пациенти и проби. За постигане на висока възпроизводимост, лабораторията трябва да бъде свободно в работата с този метод тестовата система и измерванията при стандартни условия (при същата температура, същите продължителността на реакциите).

Видео: Awareness Technology - Работа с автоматичен биохимичен анализатор ChemWell-T

Специфика, чувствителност и възпроизводимост е задължително са посочени в инструкциите и информационни листове за всички налични в търговската мрежа системи имунохимикали изпитване и имунохимикали авто-анализатор. Независимо от това, всяка лаборатория трябва самостоятелно да оцени всички тези настройки, особено възпроизводимост, в реални работни условия.