GuruHealthInfo.com

Лабораторни методи за изследване. протеинурия



Видео: лабораторни изследвания: Хематология

Малки количества от протеина са открити в урината отделена от здрави индивиди. Въпреки това, такива ниски концентрации не може да бъде открит чрез конвенционални методи на изследване. Изолиране на по-големи количества протеин, за който конвенционалните качествени тестове за протеин в урината стават позитивни, по-нататък протеинурия. Разграничаване бъбречна (вярно) и extrarenal (фалшиво) протеинурия. В бъбречна протеинурия протеин в урината прониква директно от кръвта поради увеличението на филтриране или намаляване на бъбреците гломерули тубулна реабсорбция.

Бъбречна (вярно) протеинурия

Бъбречно (истина) протеинурия е функционален и органични. най-често се наблюдава след него видове сред функционална бъбречна протеинурия:

- физиологични протеинурия бебета, че изчезва при 4 до 10 дни след раждането, както и преждевременно по-късно;
- ортостатична албуминурия, което е типично за деца на възраст 7-18 години и се появява само във вертикално положение на тялото;
- преходно (инсулт) албуминурия, които могат да бъдат причина за различни заболявания на храносмилателните органи, тежка анемия, изгаряния, наранявания или физиологични фактори тежки упражнения, хипотермия, силни емоции, изобилие, богати на протеини храни и други.

Organic (бъбречна) протеинурия се наблюдава поради преминаването на протеин от кръвния поток чрез повредени порции ендотелни гломерулна бъбречни заболявания (гломерулонефрит, нефроза, нефросклероза, амилоидоза, нефропатия бременна), заболявания на бъбреците хемодинамиката (бъбречна венозна хипертензия, хипоксия), трофични и токсични (включително включително и такива) ефекти върху гломерулната стените на капилярите.

Extrarenal (фалшиво) протеинурия

Extrarenal (фалшива) протеинурия в която източник на протеин в урината е смес от левкоцити, еритроцити, бактерии, уротелни клетки. наблюдавани по време на урологични заболявания (уролитиаза, бъбречна туберкулоза, бъбречни и туморни пикочните пътища, и т.н.).

Определяне на белтък в урината

Повечето от качествени и количествени методи за определяне на протеин в урината, базирани на коагулация в обем урина или на граничната повърхност (и киселина урината).

Допълнителни качествени методи за определяне в урината bedka най-широко стандартизиран тест с сулфосалицилова киселина и пръстеновиден проба Гелър.

Стандартизиран тест с sulfasalitsilovoy киселина се провежда както следва. Двете епруветки се излива върху 3 мл филтрува урината. Един от тях се прибавя 6-8 капки разтвор на 20% sulfasalitsilovoy киселина. На тъмен фон се сравняват двете тръби. Помътняване на урината в тръбата с sulfasalitsilovoy киселина показва наличието на протеин. Преди изследването е необходимо да се определи реакцията на урина, и ако е алкална, след това се подкислява с 2-3 капки от 10% разтвор на оцетна киселина.

Geller проба основава на факта, че наличието на белтък в урината в интерфейса на азотна киселина и урина коагулацията настъпва и изглежда бял пръстен. В епруветката се излива 2.1 мл 30% разтвор на азотна киселина и внимателно се наслоява върху стената на тръбата е точно същото количество филтрува урината. Външният вид на бял пръстен на границата на две течности показва присъствието на протеин в урината. Трябва да се помни, че понякога бял пръстен е оформен с голям брой на урат, но за разлика от протеина изглежда пръстен малко над границата между двата флуида и се разтваря при нагряване [Pletnev NG 1987].

На количествени методи са най-често използваните:

1) единен метод Brandberg-Roberts-Stolnikova, изграждане на пръстеновидния пробата Geller;
2) fotoelektrokolorimetrichesky метод за количествено определяне на протеин в урината на мътност образуван при добавяне sulfasalitsilovoy киселина;
3) Тест биурет.

Протеин Идентификация в урината опростена ускорен метод се провежда чрез колориметричен метод, използващ индикаторна хартия, която се произвежда от «Lachema» (Словакия), «Albuphan», «Ames» (Англия), «Albustix», «Boehringer» (Германия), «Comburtest» и други. Методът се потапят в урината специална хартия лента, импрегнирана tetrabromfenolovym синьо и цитратен буфер, който променя цвета си от жълт в синьо, в зависимост от съдържанието на протеин в урината. Концентрацията на протеин в приблизително тест урината се определя чрез стандартна скала. За да се получат правилни резултати, трябва да бъдат изпълнени следните условия. рН на урината трябва да бъде в 3,0-3,5- в твърде алкална урина (рН 6.5) се получава фалшив положителен резултат, и при твърде кисел урината (рН 3.0) - фалшиви отрицателни.

Документът трябва да бъде в контакт с не повече от посочени в инструкциите на разследван урината, в противен случай тестът ще даде фалшиво положителна реакция. Последното също се наблюдава, когато съдържанието в урината на големи количества слуз. Чувствителността на различни видове хартия и серия може да бъде различен, така количествена оценка на белтък в урината по този метод, трябва да бъдат лекувани с повишено внимание. Определяне на неговото количество в дневна урината като се използва тест хартия не могат [Pletnev NG 1987]

Определяне на дневния протеинурия

Има няколко начина, за да се определи количеството на протеина освободен в урината на ден. Най-простият метод е Brandberg -Robertsa-Stolnikova.

Методика. 5-10 мл бърка дневно урина изсипва в тръба и стените на своята внимателно се прибавя 30% разтвор на азотна киселина. В присъствието на протеин в урината в количество от 0.033% (т.е. 33 мг на 1 литър урина) в рамките на 2-3 минути се появява фините но ясно видими бял пръстен. В отрицателна проба ниска концентрация. По-високо съдържание на протеин в урината се определя от количеството на урината многократно разреждане с дестилирана вода, докато докато се образува не пръстен. Крайната тръба, при което пръстенът е все още видими, концентрацията на протеин ще бъде 0,033%. 0.033 умножаване на степента на разреждане на урина, съдържание на протеин се определя в 1 л неразреден урина в грамове. След това изчислява съдържанието на протеин в урината дневно съгласно формулата:

К = (х·-V) / 1000

където К - количество на протеин в дневната урината (ж) - х - количество на протеин в 1 литър урина (ж) - V - количеството на урината на ден, разпределени (мл).

Обикновено през деня урината се освобождава 27-150 мг (средно 40-80 мг) протеин.

Този анализ позволява да се определи само урина фин протеини (албумин). По-точни количествени методи (колориметричен метод на Келдал и др.) Са доста сложни и изискват специално оборудване.

В бъбречна протеинурия в албумин в урината се открояват, не само, но и други видове протеини. Нормално proteinogramma има следният процент (С Seitz, и др, 1953.): Албумини - 20%, &алфа-1-глобулин - 12% &алфа-2-глобулин - 17% &у - глобулин - 43% &бета - глобулини - 8%. Съотношението на албумини да глобулини варира при различни бъбречни заболявания, т.е. нарушен количествено съотношение между протеинови фракции.

Най-честите методи uroproteinov фракциониране, са както следва: осоляване неутрални соли, електрофоретичен фракциониране, имунологични методи (реакция съгласно Mancini радиална имунодифузия, анализ имуноелектрофореза, pretsipitatsionny имуноелектрофореза), хроматография, гел-филтрация и ултрацентрофугиране.

методи на фракциониране Въвеждането uroproteinov въз основа на изследването на електрофоретичната подвижност, променливост на молекулно тегло, размер и форма uroproteinov молекули, е възможно да се разпределят, специфични за определен проучване видове болестни протеинурия хлабини отделните плазмени протеини. Понастоящем са идентифицирани в урината на повече от 40 плазмени протеини, включително при нормална урина плазмен протеин 31 [Berggard, 1970].

селективен протеинурия

През последните години, на концепцията за селективност на протеинурия. През 1955 г. Хардуик и скуайър са формулирани понятието "селективен" и "неселективен" протеинурия, определяне, че филтрирането на плазмени протеини в урината е обект на определен модел: по-високо молекулно тегло на протеина се екскретира в урината, по-малко просветът и по-ниската концентрация на крайния урина. Протеинурия, съответстващ на този модел е селективно, за разлика от неселективни, което е характерно за изкривяване модели получени.

Откриване на белтък в урината с относително високо молекулно тегло, показва липса на селективност бъбречна филтър и изрази поражение. В тези случаи се говори за ниска селективност на протеинурия. Следователно, понастоящем широко определят протеинови фракции урина, използвайки техники електрофореза в нишесте и полиакриламид гел електрофореза. Резултатите от тези изследователски методи могат да бъдат оценявани по селективността на протеинурия.

Според V.S.Mahlinoy (1975), най-обосновано е да се определи селективността на протеинурия чрез сравняване хлабини 6-7 отделни кръвно плазмени протеини (албумин, traneferrina, &алфа-2 - макроглобулин, IgA, IgG, IgM) с използване на точни и специфична реакция количествени имунологични радиална имунодифузия съгласно Mancini, и анализ имуноелектрофореза pretsipitalnogo имуноелектрофореза. Степента на селективност се определя от индекса на селективност протеинурия, представляваща съотношението на референтните и сравняваните протеини (албумин).

Проучване клирънс на отделните плазмени протеини позволява да се получи надеждна информация за състоянието на филтруване основни мембрани на бъбречни гломерули. Връзката между характера на протеините отделят с урината и промените в гломеруларните базални мембрани и се изразяват като константа, че uroproteinogramme могат косвено да съди патофизиологични промени в бъбречните гломерули. Обикновено, средният размер на порите на гломеруларна базална мембрана е 2,9-4 ° NM А, които могат да пропусне протеини с молекулно тегло до 104 (Mioglobulin, кисел &алфа-1 - гликопротеин, имуноглобулинови леки вериги, Fc и Fab - фрагмента на IgG, албумин и трансферин).

Гломерулонефрит, нефротичен синдром размери на порите увеличаване на гломерулна мазета мембрани и следователно базалната мембрана става пропусклива за протеиновите молекули с голям размер и маса (церулоплазмин, хаптоглобин, IgG, IgA, и др.). В крайна бъбречно увреждане гломерулна в урината изглежда гигантски молекули кръвно плазмени протеини (&алфа-2-глобулин, IgM и &бета-2-липопротеин).

Определяне на протеин спектър урина, можем да заключим, че първична лезия на някои части на нефрона. За гломерулонефрит, предимно засяга гломерулна мазета мембрани характеризират с наличието в урината на среден и протеини. За пиелонефрит, предимно засяга базалната мембрана на тубули характерни krupnomolekulyarnyh отсъствие и наличие на повишени количества на средно и ниско молекулно тегло протеини.

&бета-2-микроглобулин

В допълнение към добре известни протеини, като албумин, имуноглобулини, липопротеини. фибриноген, трансферин, урината съдържа плазмени протеини mikroproteiny, включително клиничен интерес &бета-2-микроглобулин отворен Berggard и Bearn през 1968 г. като с ниско молекулно тегло (относителна молекулна маса от 1800), преминава свободно през бъбреците гломерули и почти напълно абсорбира в проксималната тръба. Това позволява използването на количествено определение &бета-2-микроглобулин в кръвта или урината за определяне на скоростта на гломерулната филтрация и бъбречния капацитет резорбция на протеини в проксималните тубули.

Концентрацията на протеин в плазмата и урината се определя чрез радиоимуноанализ като се използва стандартен набор от «Phade-BAS &бета-2-mikroiest »(фирма" Pharmasia ", Швеция). При здрави индивиди серумът съдържа средно 1.7 мг / л (диапазон 0,6 до 3 мг / литър) в урината - средно 81 мг / л (максимум 250 мг / л) &бета-2-микроглобулин. Излишъкът от урина в по-горе си 1000 мкг / л - патологичен феномен. съдържание &бета-2-микроглобулин в кръвта се увеличава в заболявания, свързани с нарушена скорост на гломерулна филтрация, по-специално в остър и хроничен гломерулонефрит, поликистозно бъбречно заболяване, нефросклероза, диабетна нефропатия, остра бъбречна недостатъчност.

концентрация &бета-2-микроглобулин в урината се увеличава в заболявания, свързани с нарушена функция reabsorbtsionnoy тръбичка, което води до увеличаване на неговата екскреция в урината в 10-50 пъти, по-специално в пиелонефрит, хронична бъбречна недостатъчност, гноен интоксикация и др. Характерно е, цистит разлика не пиелонефрит наблюдаваното увеличение в концентрацията &бета-2-микроглобулин в урината, което може да се използва за диференциална диагноза на тези заболявания. Въпреки това, при интерпретирането на резултатите от изследването трябва да се счита, че всяко повишаване на температурата винаги е придружено от увеличаване на отделянето &бета-2-микроглобулин в урината.

Средните кръв и урина молекули

Средна молекула (SM), наречени друго протеинови токсини са вещества с молекулно тегло 500-5000 далтона. Физическото им структура е неизвестен. Структурата на CM се състои от най-малко 30 пептиди: окситоцин, вазопресин, ангиотензин, глюкагон, адренокортикотропен хормон (АСТН), и т.н. прекомерно натрупване на МС се наблюдава намаление на бъбречната функция и съдържанието в кръвта на голям брой деформирани протеини и техните метаболити .. Те имат различна биологична активност и невротоксичност вторична причина имуносупресия, вторична анемия, инхибират биосинтеза на еритропоезата протеин и инхибира активността на много ензими, които разрушават фаза на възпаление.

SM ниво на кръвна проба и скрининг на урината се определя, както и чрез спектрофотометрия в областта на ултравиолетова дължина на вълната от 254 и 280 mm спектрофотометър CI-8В и динамична спектрофотометрия с компютърна обработка в диапазона 220-335 нанометра дължина на вълната в същата компания Beckman спектрометъра , При нормална получите CM кръв съдържание, равно на 0.24 ± 0.02 СЛС. единици, а в урината. - 0312 ± 0,09 реал. ф
В нормален живот продукт на организма, те се отстраняват от нормалното тъмната част на денонощието чрез гломерулна филтрация на 0.5% - 5% от използваната от друг. Всички фракции SM изложени тубулна реабсорбция.

Neplazmennye (тъкан) uroproteiny

Освен плазмени протеини в кръвта в урината може да се neplazmennye (тъкан) протеини. Според Buxbaum и Франклин (1970), neplazmennye протеини съставляват около 2/3 от всички урина и biocolloids uroproteinov значителна част в патологично протеинурия. Тъканните протеини падат директно в урината от бъбреците или органи са анатомично, свързани с пикочния тракт, или падане от други органи и тъкани в кръв, и оттам през бъбреците гломерулна мазета мембрани - в урината. В последния случай, отделянето на протеин в урината отстраняване тъкан настъпва аналогично на плазмени протеини с различни молекулни тегла. Състав neplazmennyh uroproteinov изключително разнообразна. Сред тях, гликопротеини, хормони, антигени, ензими (ензими).

Тъканни протеини, открити в урината като се използват конвенционални методи на протеиновата химия (ултрацентрофугиране, гел хроматография, електрофореза, различни изпълнения), специфични отговори към хормони и ензими и имунологични методи. Последното позволява също така да се определи концентрацията neplazmennogo uroproteina в урината и в някои случаи да се идентифицира тъканни структури, които са се превърнали в източник на външния си вид. Основният метод за откриване на протеин в урината е neplazmennogo анализ имунодифузия с антисерум, получен чрез имунизация на експериментални животни и хора урина отцежда (адсорбирани) в последващ плазмените протеини.

Изследването на ензими в кръвта и урината

Когато процесът на заболяване наблюдава дълбоки щети жизнените клетки, придружени от освобождаването на вътреклетъчни ензими в течност среда на тялото. Enzimodiagnostika се основава на определянето на редица ензими, изолирани от клетки от увредени органи и не характерни за серума.
Изследвания Nephron хора и животни са показали, че някои от неговите части имат висока ензим диференциация, тясно свързан с функциите, изпълнявани от всеки отдел. В бъбречни гломерули съдържа относително малък брой различни ензими.

Бъбречни тубуларни клетки, по-специално близко до съдържат максималния брой ензими. Тяхната висока активност се наблюдава в течение на Henle, прави тубули и събиране на канали. Промени в активността на някои ензими в различни бъбречни заболявания зависят от процеса на характер, тежест и локализация. Те са наблюдавани преди морфологичните промени в бъбреците. Тъй като съдържанието на различни ензими ясно локализирани в нефрона, определението на даден ензим в урината може да допринесе за локално диагностициране на патологичен процес в бъбреците (гломерули, тубули, корова и мозък), диференциална диагноза на бъбречни заболявания и за определяне на динамиката (затихването и изостряне) на процеса в бъбречната паренхим.

Дължина диференциална диагноза на заболявания на урогениталната система се използва за определяне на активността в кръвта и урината на следните ензими: лактат дехидрогеназа (LDH), левцин аминопептидаза (LAP), кисела фосфатаза (АР), алкална фосфатаза (ALP), &бета -. глюкуронидаза, глутаминова-оксалацетат трансаминаза (GSCHT), алдолаза transamidinase др Ензимната активност в серума и урината се определя чрез биохимични, спектрофотометричен, хроматографски, флуориметрично и хемилуминесцентни методи.

Enzimuriya при бъбречно заболяване е по-изразено и естествено, от enzimemiya. Това е особено силно изразен в острата фаза на заболяването (остър пиелонефрит, травма, тумор гниене, инфаркт на бъбреците, и т.н.). В тези заболявания открити transamidinase висока активност, LDH, алкална фосфатаза и KF, хиалуронидаза, LAP и неспецифични ензими като GSCHT, каталаза [Polyantseva LR 1972].

Селективно локализация на ензими в Nephron при откриване на LAP и алкална фосфатаза в урината може уверено да се каже на остри и хронични бъбречни заболявания (остра бъбречна недостатъчност, бъбречна тубуларна некроза, хроничен гломерулонефрит) [Shemetov VD 1968]. Според A.A.Karelina и L.R.Polyantsevoy (1965) transamidinase съдържа само две тела - бъбрек и панкреас. Това е митохондриален ензим и бъбреците при нормална кръв и урина отсъства. В различни бъбречни заболявания transamidinase появява в кръвта и урината, и в панкреаса лезии - само в кръвта.

Диференциална тест при диагностицирането на гломерулонефрит и пиелонефрит Krotkiewski (1963) счита, активността на алкалната фосфатаза в урината, увеличение, което е по-характерно за пиелонефрит и диабетна гломерулосклероза, отколкото за остра и хронична нефрит. Увеличаването на динамиката amilazemiya докато намаляване amylasuria може да показва нефросклероза и бъбречно белези, LAP има най-голямата стойност в патологични промени в гломерулите и сложен тубули на бъбреците, тъй като неговата концентрация в тези региони на нефрона висока [Shepotinovsky VP и сътр., 1980]. препоръчителна определение за диагностика лупусен нефрит &бета - глюкуронидаза и CF [Privalenko MN и сътр., 1974].

При оценката на enzimurii роля в диагностиката на заболявания на бъбреците трябва да се вземат предвид следните разпоредби. Ензими, които са по своята същност протеини с малка молекулна маса могат да преминат през непокътнати гломерули, определянето на т.нар физиологичен enzimuriyu. Сред тези ензими непрекъснато се определя в урината &алфа - амилаза (относителна молекулна маса 45 Ltd.) и uropepsin (относително молекулно тегло 38 000).

Заедно с ензимите с ниско молекулно тегло в урината на здрави индивиди може да се намери в малки концентрации и други ензими: лактат дехидрогеназа, аспартат и аланин аминотрансфераза, алкална фосфатаза, и KF, малтаза, алдолаза, липаза, протеаза и различни пептидаза, sulphatase, каталаза, рибонуклеаза, пероксидаза [King, Boyce 1963].

Високо молекулно ензими с относително молекулно тегло над 70000-100000, съгласно Richterich (1958) и Hess (1962), могат да проникнат в урината само в нарушение на гломерулна филтър пропускливостта. Нормално съдържание на ензими в урината не изключва патологичен процес в бъбреците с уретера оклузия. Когато epzimurii възможни изходни ензими не само от самите бъбреците, но също и от други паренхимни органи, мукозните мембрани на клетки на уринарния тракт, на простатата и урина образува елементи с хематурия или левкоцитурия.

Повечето ензими неспецифично по отношение на бъбреците, от къде ензими са намерени здрави и болни в урината, е трудно да се установи. Въпреки това, степента enzimurii дори дължината на не-специфични ензими при бъбречно заболяване е по-висока от нормалното или това, което се наблюдава при заболявания на други органи. За повече ценна информация може да осигури цялостно проучване на динамиката на редица ензими, особено орган-специфично, като трансаминазите.

При разглеждането на въпроса за бъбречен произход на ензима в урината помага да учат изоензими в идентифицирането на фракции, характерни за изследваната орган. Изоензими - това ензими чрез действието на изогенни (катализира същата реакция), но хетерогенна в химическата структура и други свойства. Всяка тъкан има характерен за нея изоензим спектър. Ценна изоензимите техники за разделяне са електрофореза в нишесте и полиакриламид гел електрофореза и йонообменна хроматография.

Bence-Jones протеин

В мултиплен миелом и макроглобулинемия на Waldenstrom в урината открива протеин Bence Jones. Метод за откриване на споменатия протеин в урината се основава на termopretsipitatsii реакция. Преди използват методи, чрез които разтваряне на протеина се оценява при температура от 100 ° С и повторно утаяване с последващо охлаждане, ненадеждни, тъй като не всички протеинови органи Bence Jones притежават подходящи свойства.

По-надеждно откриване на парапротеин чрез утаяване при температура 40 -60 ° С Въпреки това, в тези условия на отлагане не може да настъпи твърде кисел (рН < 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН > 6,5) моче, при низкой ОПМ и низкой концентрации белка Бенс-Джонса. Наиболее благоприятные условия для его осаждения обеспечивает методика, предложенная Patnem: 4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл 2 М ацетатного буфера рН 4,9 и согревают 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белка Бенс-Джонса в течение первых 2 мин появляется выраженный осадок.

Когато концентрацията на протеин Bence Jones по-малко от 3 г / л проба може да бъде отрицателно, но на практика е изключително рядко, тъй като неговата концентрация в урината обикновено повече е значителна. На теста с кипене не могат да бъдат напълно разчита. Със сигурност той може да бъде открит в урината имуно-електрофореза, метод, използвайки специфични серуми срещу тежките и леките вериги на имуноглобулините.

NA Lopatkin
Споделяне в социалните мрежи:

сроден

© 2011—2022 GuruHealthInfo.com