Методи за лабораторна диагностика. имунологични методи

Видео: CMD - Център по молекулярна диагностика

Имунологични методи имат важна диагностична и прогностична стойност в много ревматични заболявания.

Проучване неспецифичен имунитет включва изследване на броя на левкоцити и моноцити в кръвния серум, допълва компоненти, цената за мобилност, фагоцитни и микробицидна активност на мононуклеарни фагоцити, производство на провъзпалителни цитокини (IL-IP, IL-6, TNF-алфа, и др.).

Нивата на увеличение на комплемента се наблюдават при остро възпаление, инфекциозни процеси и намаляване - под имунокомплекс заболявания. По този начин, намаляване на концентрацията на С2-Cs, и допълва компоненти в реакцията на утаяване с антисеруми типичен за SLE, RA, анкилозиращ спондилит, васкулит, язвен колит. Това се дължи на активирането на системата на комплемента поради образуването на имунни комплекси. Определяне диагностично значими компоненти на комплемента в синовиалната течност (съдържание намалява RA) в гръбначно-мозъчната течност (съдържание намалява с лупус tsereb-rovaskulite) в биопсии на кожата и бъбреците.

Състояние клетъчния имунитет се преценява чрез количествени показатели (абсолютни и процентни на Т-лимфоцити, активните Т-лимфоцити, Т-хелперен тип I и Т-цитотоксични лимфоцити) и функционални тестове.

Най-често използваните:
&diams- реакция инхибиране миграция на левкоцити (RTML) в присъствието на антигени и митогени: RTML с фитохемаглутинин (РНА), конканавалин A (Con А), алергени хемолитични стрептококи, стафилококи. Реакцията се основава на свойството на лимфоцити с чувствителност към специфични антигени за образуване стабилизиращ лимфокини миграция инхибиторна leykotsitov- по-висока функционална активност на лимфоцити, по-малките Цифрите RTML;
&diams- лимфоцитна реакция бластна трансформация (BTR), което се оценява с помощта на функционалната активност на Т-лимфоцити. В отговор на митогени (РНА), Con А и лимфоцитен серум и др. Трансформация на лимфоцити се среща в лимфобласти (по-големите бластни клетки се формира, толкова по-висока активност на Т-лимфоцити).
Субпопулациите на Т-лимфоцити, определени с моноклонални антитела.

За оценка на функционалното състояние на хуморалния имунитет при използване количествено определяне на имуноглобулини в кръвната плазма. Имуноглобулин (Ig) - са протеини, притежаващи функция антитяло и разделени на пет основни класа: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.

IgG присъства в серума в най-високата концентрация (6,39-13,49 г / л), тя представлява 80% от активността на антитялото. Разграничаване 4 подклас IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) и IgG4 (1-3%).

IgA е основният секреторен имуноглобулин намерени в слюнка, сълзи, бронхиална и чревни секрети и кърмата. тайни IgA димер е форма, съдържаща J верига, друг пептид, наречен секреторен компонент. Концентрацията на IgA в стандарта е 0,7-3,12 г / л.

IgM състои от 5 мономерни субединици, свързани чрез дисулфидни мостове и J-верига, образувайки пентамер. серумна концентрация IgM обикновено възлиза на 0,86-3,52 г / л.

IgD е в много малки количества в серума, но е основен тип на имуноглобулин присъства върху мембраната на В-лимфоцити. IgE играе важна роля в реакциите на незабавна свръхчувствителност.

За да се определи концентрацията на основни класа имуноглобулини (IgG, IgM, IgA), използвайки метода на радиална имунодифузия или нефелометричен техника, IgE - силно чувствителна радиоимунологични или ензимен имуноанализ техники.

Определяне на концентрацията на имуноглобулини се използват за диагностика на първични или вторични имунодефицитни (в тези случаи, намаляване на концентрацията на основните класове имуноглобулини), и моноклоналното immunoglobulinopaty (в комбинация с имуноелектрофореза серум и урина).

Най-честата форма на имунодефицит е IgA-immunodefi-оп, развитието на които понякога се наблюдава при ревматични заболявания, и могат също така да се проведе на фона на някои лекарства (D-пенициламин, сулфасалазин, каптоприл и др.). Нарастващи концентрации на IgA често наблюдавани при серонегативни спондилоартропатии, хеморагичен васкулит, синдром на Сьогрен, псориатична артропатия.

Често при възпалителни ревматични заболявания се наблюдава развитието на поликлонално Hyper.
Ревматоиден фактор (RF) са автоантитела към Fc-фрагмента на IgG, въпреки че те могат да бъдат свързани с IgM и IgA.

Може блокиране ревматоиден фактор автоложна IgG, което води до увеличаване на процента скрита, RF комплекс (с удължен период на ревматоиден артрит с vistseritami).

За идентифициране на RF клас М се прилагат:

&diams- аглутинация реакционни латекс инертни латексни частици, покрити с човешки Ig. Най-високата даване серумно разреждане аглутинация титър счита реакция. Тигърът на 1:20 или по-висока, се счита като положителна;
&diams- реакция Vaaler Rosa с овчи червени кръвни клетки, покрити с анти-заешки овчи червени кръвни клетки.

Най-високото серумно разреждане даване аглутинация диагностично значим, ако не и по-малко от 1:32.
Лупус (LE) -клетки. Наличието на LE-клетки, дължащи се на присъствието в серума на IgG класа антитела към ДНК-хистон комплекс, които реагират с ядра се освобождават от различни клетки, в резултат на разрушаване на тези клетки. LE-клетки са намерени в 60-70% от пациентите, страдащи от SLE. Те са зрели неутрофили, фагоцитоза ядрено вещество на разрушените клетки. В цитоплазмата на неутрофили намерено голям хомогенно включване (хематоксилин телца).

В случай на непълна фагоцитоза от неутрофили натрупани около телешки хематоксилин-образно гнездо (розетка образуване явление). Резултати открие поне LE-5 клетки на 1000 бели кръвни клетки се счита за положително. На единица количество LE-клетки са открити в 10% от пациентите с ревматоиден артрит, хроничен активен хепатит, лекарствени алергии, нодозен нодоза, системна склеродермия, дерматомиозит, смесено заболяване на съединителната тъкан.

Антинуклеарни антитела (АНА) най-често определени при ревматични заболявания и се срещат в над 90% от пациентите SZST. Те са семейство на автоантитела, взаимодействащи с рибонуклеинови киселини и протеини, ядро, цитоплазмени антигени. AHA определя от индиректна имунофлуоресценция, двойно имунологична и kontrelektroforeza, ELISA и имуноблот.

Когато се използва индиректен имунофлуоресцентен метод на практика има шест вида оцветяване или луминисценция, ядра, които са важни за диагностика на системни заболявания на съединителната тъкан:
&diams- хомогенна оцветяване се дължи на наличието на антитела срещу двойноверижна ДНК и хистони, най-характерни за SLE и лупус доза;
&diams- периферна оцветяване причинени от циркулиращи антитела на ядрената мембрана (специално за SLE);
&diams- гранулиран оцветяване се появява най-често, което показва наличието на различни Аха така има ниска специфичност (отбелязано в SLE, RA с висцерални прояви, смесено заболяване на съединителната тъкан);
&diams- nucleolar (nucleolar) луминисценция поради компоненти антитяло ядърце среща в SSC, болест Shegrena- ANF понякога намерени в ендокринни заболявания (poliendokrinopatiya, диабет тип I диабет, тиреоидит, тиреотоксикоза), кожни заболявания (псориазис, пемфигус), както и фон на бременност след трансплантация на органи и тъкани (в развитието на реакцията "присадка срещу гостоприемник"), при пациенти на хемодиализа;
&diams- центрометрична луминесценция се наблюдава появата на антитела към центромери хромозоми (характеристика хроничност MICs);
&diams- цитоплазмен светлина показва наличието на антитела срещу тРНК синтетаза, по-специално Jo-1 (общо в дерматологични и полимиозит).

Методи на радиоактивни и имунната свързване, радиална имунодифузия, имунопреципитация показват, АНА на определени ядрени антигени.

Антителата на дезоксирибонуклеинова киселина (ДНК). Антитела срещу нативна (двойноверижна) ДНК, по-специално тези, които се откриват чрез тестове радиоимунологични (метод Pharr), относително специфичен за SLE. Тяхното определение е от съществено значение за оценка на активността на заболяването, прогнозиране развитието на обострянията и ефективността на лечението. Антитела към денатуриран (едно-) ДНК по-малко специфични за SLE и често открити в други ревматични заболявания.

Антитела към хистони. Хистоните - основен компонент, състоящ се от три субединици: две димери Н2А, Н2В, че фланкиран на NS-H4 тетрамера и свързан с трети подединица, състояща се от две завъртания на ДНК молекулата.

Антитела към хистони Н2А, Н2В се намират в почти всички пациенти със синдром на лекарство лупус (индуцирана novokainamidom), при пациенти, получаващи прокаинамид, но нямат симптоми на лупус, както и в 20% от пациенти с SLE.

Антитела на рибонуклеопротеина (RNP). Антитела към рибонуклеопротеинова съдържащи анти-Sm, анти-snRNP (U1RNP), анти-ро / SS-А, анти-La / SS-B, намерено в SLE общо повече от антитела срещу двойноверижна ДНК. концентрацията на тези антитела кръв е изключително висока. Намерени в смесена болест на съединителната тъкан, най-малко - при пациенти с SLE, който води клиничната проява на кожни лезии, субакутен SSD и други автоимунни ревматични заболявания.

Антитела срещу Sm (Smith) -antigenu. Антитела на Sm-антиген се намират само в SLE. Използвайки метод имунофлуоресценция са идентифицирани в 30% от случаите и 20% - в съответствие с метода на хемаглутинацията. Антитела на Sm-антигенът не се откриват в други ревматични заболявания, така че те се считат за маркери на SLE антитела и тяхното откриване е един от диагностичните критерии за болестта. В присъствието на SM-антитела се наблюдава за злокачествено заболяване на централната нервна система, лупус психоза и относително запазване на бъбречната функция. Въпреки това, нивото на антитела срещу Sm-антигена не е свързана с дейността и клинични подтипове на SLE.

Антитела към Ro (Robert) / SS-A са насочени срещу ядрени рибонуклеопротеини, които са свързани с ил-Y5 цитоплазмена РНК, транскрибирана от РНК полимераза III. В зависимост от чувствителността на използвани за изследване антитяло Ro / SS-A методи са открити в 60-78% от пациентите със синдром на Сьогрен, в 96% от пациентите с болест на Sjogren и 35-57% от пациентите с SLE.

В SLE данни за производството на антитела, свързани с определен набор от лабораторни и клинични прояви на нарушения: фоточувствителност, синдром на Сьогрен, увреждане на белите дробове, лимфопения и тромбоцитопения хиперпродукция RF. Увеличаването на концентрацията на антитела срещу RO / SS-A в комбинация с хипер IgM RF често се наблюдава в ANF-отрицателни подтип болест (в 2-5% от пациенти с SLE) - т.нар субакутен Кожен Лупус.

Антитела към La (Lane) / SS-B, насочени срещу протеина, свързан с транскрипти на РНК полимераза III. Антителата на La / SS-B в повечето случаи се появят във връзка с антитела срещу RO / SS-A, като последният може да се появи в изолация. Антителата на La / SS-B се намират в заболяването и синдром на Sjogren, комбиниран с RA и SLE (но не и системна склеродермия) и първична билиарна цироза. В SLE антитела към SS-B / La-антиген е по-вероятно да се появи в началото на заболяването, което се развива в напреднала възраст, и е свързана с по-ниска честота на развитие нефрит.

Scl-70 антитела обикновено се откриват в дифузна форма на системна склероза. В този присъствие заболяване Scl-70 антитела в комбинация с гени превоз HLA-DR3 / DRw52 17-пъти по-висок риск от развитие на белодробна фиброза. Откриване на Scl-70 антитела при пациенти с феномен на Рейно изолиран показва висока вероятност за развитие на системна склеродермия.

Antitsentromernye антитела (ASA) са намерени 20% от пациенти със системна склероза (повечето от тях има доказателства за CREST синдром), най-малко - в първична билиарна цироза (половината от тези пациенти, има признаци на склеродермия), и много рядко - в хроничен активен хепатит и първичен белодробна хипертония. Антитела срещу центромер разглежда като неблагоприятен прогностичен показател за развитие на системна склероза при пациенти със синдром на Рейно.

Антитела към aminoatsilsintetaze тРНК (antisintetaznye антитела) са открити в присъствието на пациенти с полимиозит интерстициална белодробна болест. Като цяло синтетаза антитела се откриват в 40% от пациентите с полимиозит, 54% от пациентите с идиопатична дерматомиозит в случай на форми на тези заболявания и само 6% от пациентите с полимиозит, един от други прояви по време на тумор DBST- миозит тези антитела не се откриват. Продукти antisintetaznyh антитела е свързано с развитието на така наречения "синдром на antisintetaznogo".

Antifilaggrinovye антитела (APL) са семейство, което включва antikeratinovye антитяло antiperinuklearny фактор антитела, Sa-антиген и антитела към наскоро описан цикличен цитрулин-съдържащ пептид. Според съвременните концепции, основната антигенната детерминанта призната от тези антитела е цитрулинирани пептиди, които, по-специално, настоящото в синовията на пациенти с ревматоиден артрит (RA). AFA са силно специфични за RA. Най-широко използвани са AFA при диагностицирането на РА рано. Няколко изследвания са показали по-агресивен курс на РА в присъствието на тези антитела в пациенти.

Антитела към фосфолипиди (APL) - хетерогенна група от антитела, които реагират с отрицателно зареден (фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, кардиолипинът) и неутрални (фосфатидилетаноламин, фосфатидилхолин) фосфолипиди. Те включват лупус антикоагулант, карди-антитела и фактори, които определят развитието на фалшиво положителен Васерман.

Лупус антикоагулант (LA) - имуноглобулини класове IgG и / или IgM, инхибират ин витро един или повече fosfolipidzavisimyh реакции коагулацията, BA се третира като представител на семейството на антитела към фосфолипиди, техния синтез е свързано с развитието на артериална или венозна тромбоза.

Антикардиолипинови антитела (ACL). За определяне на CLA използва метод имуноанализ. CLA продукти (особено при високи титри на IgG ACL), както и образуването на BA, е свързано с развитието на антифосфолипиден синдром.

Фалшива положителна реакция Wassermann е бърза серологична диагностика на сифилис по метод въз основа на стандартната суспензия флокулация фосфолипид (кардиолипин) серум на пациента, съдържащ анти-treponemal антитяло (reagin). За по-точна диагностика на сифилис, използващи имунофлуоресцентен метод treponemal антиген.

В 15-20% от пациентите с SLE се открива фалшиво-положителна реакция Wassermann, и 30% от здрави индивиди с фалшиво-положителна реакция Wassermann в последващото развитие на SLE. Много често фалшиво положителен Васерман открити при пациенти с антифосфолипиден синдром.

Антинеутрофилни tsitoplazmatineskie антитела (ANCA). ANCA са семейство на автоантитела, насочени срещу специфични антигени, присъстващи в цитоплазмата на неутрофили. Има два вида ANCA че определени чрез индиректен имунофлуоресцентен метод, използвайки фиксирани неутрофили абсолютни донори алкохол. Антитела да причинят дифузно протеиназа III (класически) и цитоплазмен блясък означен като к-ANCA или р-ANCA. Антитела срещу миелопероксидаза, еластаза и лактоферин се характеризират перинуклеарно тип емисии и определени като перинуклеарно или р-ANCA. ANCA често се открива в системен васкулит.

Стрептококи antistreptococcal инфекция води до повишаване на титрите на антителата. Определяне antistreptococcal антитела се използват за диагностика на остра ревматична треска (остра ревматична треска) и остър гломерулонефрит.

Най-широко определяне на антитела срещу стрептолизин О (ASL-О), стрептокиназа (АСК) и streptodezoksiribonukleaze (анти-ДНаза В). Увеличението на титрите SLA-O се намира в повече от 2/3 от пациентите с остра ревматична треска, а само половината от пациентите с остър гломерулонефрит. Максималните титри antistreptococcal антитела, идентифицирани по време на развитието на артрит и по време на развитието на кардит и хорея титри на тези антитела са значително намалени, което намалява диагностичната стойност на този тест.

Важно за диагностика са реакция за откриване на антитела след инфекция: Wassermann реакция, допълва реакция фиксиране с туберкулоза, pseudotuberculosis, Yersinia, дизентерия и други антигени, HBS-антигени, гонококови (Bordet-Генгоу реакция) и бруцелоза (реакционни Wright-Heddlsona) антигени титър на анти-Chlamydia антитела.

Криоглобулини - група на серумните протеини с анормална способността за обратимо утаяване или образуване на гел при ниска температура. Криоглобулини могат да бъдат открити в различни заболявания на вътрешните органи, включително доста често в системни ревматични заболявания.

В зависимост от състава на криоглобулини е разделена на три основни типа. Тип I се състои от моноклонални имуноглобулини IgA или IgM, най-малко - моноклонални леки вериги (леки вериги в протеин). Тип II (наблюдава в така наречената смесена криоглобулинемия), съставена от моноклоналното имуноглобулин (обикновено IgM, рядко - IgA или IgG), антиглобулиновия като активност срещу поликлонален IgG. Тип III (наблюдавано в така наречената смесена криоглобулинемия) се състои от един или повече класове на поликлонални имуноглобулини. Най-честата форма на криоглобулинемия при ревматични заболявания е той типа III се намира в SLE, RA, системна склероза, синдром на Sjogren.

Циркулиращи имунни комплекси (CIC). Увеличаващи се концентрации отразява CEC възпалителни и имунологична активност на патологичен процес в SLE, RA, серонегативни спондилоартропатии.

VI Мазур

Споделяне в социалните мрежи:

сроден