Фактор Лайден

Както бе споменато по-горе, ген аномалия на коагулационен фактор V G 1691>А е открит през 1994 г. от R. Bertina и сътр. Един нуклеотидна замяна на гуанин в аденин при позиция 1691 (1691 G>А) в екзон 10 F5 ген причинява молекулно дефект на коагулационен фактор В. Тъй заместване при позиция 506 на молекула proaktselerina аргинин да глутамин (Arg506Gln) нарушена способност да се разпадне, в резултат на системата за образуване дисфункция антикоагулантен протеин С и тенденция за рецидив тромбоза. Генетични аномалии на коагулационен фактор V (Leiden) е най-честата тромбофилия дефект в европейското население.

За откриване на генетични аномалии изпълнения, използвайки PCR. Висока чувствителност и специфичност на PCR осигури ин витро синтезиран олигонуклеотиди комплементарни на съответния регион на гена на човешки коагулационен фактор В.

Липсата на единна номенклатура на генетични дефекти, причинени широко разпространена в съвременната научна литература многобройни признаци на тази аномалия: F5: 1691 G>А, Rs6025, Arg506Gln, G1691A, R506Q, Leiden (leydenovskaya) и други.

принцип на метода

За идентифициране на полиморфни алели в F5 генна амплификация, използвайки съответните части на ген чрез PCR с последващо определяне на амплификационни продукти.

Реактиви и оборудване

• Контролните проби с алела от див тип и мутантен алел.
• За да се определи аномалии F5 1691 G>Използват се два праймера. Праймер 1 (преден праймер): ACGTTGGATGC TGAAAGGTTACTTCAAGGAC, Праймер 2 (обратен праймер): ACGTTGGATGCTCTGGGCTAATAGGACTAC.
• Thermocycler и друго оборудване за извършване на PCR.

Кръвни проби за изследване за изследвания материал може да бъде всеки източник на ДНК, но се използва по-венозна кръв, които се вземат в епруветки, съдържащи EDTA. Пробите се съхраняват преди изследването при температура от 2 ... + 8 ° С в продължение на до 24 часа. Long съхранявани проби могат да бъдат само в замразено състояние при -40 ... 70 ° С

Изолиране на ДНК от клинични проби от материал може да се извърши по различни методи, например чрез използване на базата на силициев диоксид комплекти, определя микроцентрофуга колони комплекти на базата на екстракция с фенол-хлороформ и др.

Методи за определяне на

Методът се основава на копие избирателните ДНК област многократно използване ин витро ензим. Напредъкът в изследването трябва да отговаря на избраното оборудване и процедурата на PCR анализ (гел електрофореза, светкавицата или др.).

Видео: Холандия, Северна Холандия. Part1. 06-2011

Оценка на резултатите от изследването

Оценка на резултатите се извършва по начин, позволяващ замяната полиморфна олигонуклеотид дом. Пример визуализират резултатите от амплификация е показано на фиг. 5.1.

Видео: всички градове и страни по света на едно място

Изпълнения leydenovskoy аномалия резултати за откриване на V ген коагулационен фактор следните: G / A - хетерозиготни форма аномалии в позиция 1691- А / А - хомозиготни аномалия. Популацията преобладава генотип G / G.

Тълкуване на резултатите от проучването

Превозвачите leydenovskoy F5 генни аномалии са склонни към тромбоза, което значително увеличава риска по време на бременност, употреба на орални контрацептиви, в следоперативния период и др. Джийн проявление е непълна, затова редица превозвачи не разполага с анамнеза за тромботични нарушения. В това изпълнение присъствието на хомозиготна честота мутация и тежестта на тромбоза горе. хетерозиготно за откриване на честота аномалия, съгласно литературата, е около 1-3% от населението.

заместване на аминокиселина в позиция 506 дава мястото на разцепване на молекула коагулационен фактор V активиран протеин С, което значително намалява степента на неговото разграждане. Следователно, присъствието на ген аномалии F5 G 1691>А резистентност наблюдава коагулационен фактор Va от активиран протеин С

Откриването на тази мутация при пациенти с рецидивиращ тромбоза позволява оправдае продължително противосъсирващи профилактика. Такова проучване може да помогне се идентифицират лицата, които трябва да вземе решение за употреба на антикоагуланти при изпълнението на операцията.

Видео: д-р Елена Berezovskaya - тромбофилия и бременност

Причини за възникване на грешки

• Грешки предварително аналитична фаза на изследването (в нарушение на време на съхранение или транспорт неадекватно биоматериал нуклеинови киселини могат да разграждат, което води до фалшиви отрицателни на резултати хепарин е в състояние да инхибира PCR, така кръвни проби не трябва да се извършват в епруветки, съдържащи хепарин).
• Замърсяване на пробите чужд биологичен материал.
• Нарушаването на принципите на зониране лаборатория за молекулярно-генетични изследвания.
• Отказ за изучаване на отрицателната контрола.
• Отказът да се извърши повторен анализ на положителни проби.
• Липса на техники за изолиране на ДНК.
• Специфичността и чувствителността на PCR праймери зависи главно на структурата, така че използването на праймери от различни производители могат да предизвикат получаването различни резултати.

Други методи за анализ

PCR варианти установено, че са надеждни лабораторни процедури, могат да осигурят висока чувствителност, специфичност и възпроизводимост. В повечето случаи тромбофилия за диагностициране на състояние, свързано с нарушена proaktselerina инактивиране може да се използва по метода на коагулация на определяне на резистентност към активиран протеин С се отбележи обаче, че други разстройства (хиперпродукция антихемофилен глобулин, VA и др.) Също са в състояние да индуцират устойчивост коагулация фактор V към активиран протеин с