Непряко диагностициране на генетични заболявания. Точността на молекулярната диагностика на възможните източници на грешки.

Непряко (косвено) подход за молекулярна диагностика исторически е по-рано и по-универсална. Тя се основава на анализ на интра- и vnegennyh полиморфни места. Тъй като последните обикновено се подават кратко ДНК-последователност на същите хомоложни хромозомни региони, които се различават в първичната структура. Тези диагностични полиморфни места могат да бъдат разположени или в самия ген или в непосредствена близост.

Задължително условие за непреки ДНК диагностика Това е наличието в семейството на болно дете или възможност да се учи неговата ДНК (петна кръв, хистологични препарати и т.н.). Създаване на съдържание информация включва идентифициране на полиморфното място, което може да се използва като маркер за молекулно дискриминация както мутант и нормален алел. В случай на автозомни рецесивни заболявания родители ще бъдат хетерозиготни за този полиморфизъм, и пациентът - хомозиготен на един алел на маркера. Тя хетерозиготирането за молекулярни полиморфизми определя съдържанието на информацията конкретно семейство с висок риск за раждане на дете с генетично заболяване. В зависимост от разпределението на маркерни алели на хомоложни хромозоми на пациента и родителите му семейство може да бъде изцяло информативен за ДНК диагностика частично информативни или uninformative.

От решаващо значение е да се анализира семейство с повишена опасност е броят на полиморфна сайтове на единичен ген, да се определи точно и да е специфичен алел наследи ген мутант, и да направи семейство напълно информативен за бъдещо PD.

точка се възползват от косвения метод - възможност за ДНК диагностика без точна идентификация на мутации в гена, дори и при липсата на точни данни за идентификация и клонирането на мутиралия ген. Неговият значителен недостатък е невъзможността да се диагноза при липса на болно дете (не може точно да се определи кои полиморфна алел свързан ген мутант), грешка в диагнозата, поради възможността за преминаване през време на мейозата и провеждане сайта на полиморфизма на здравословен алел.

Точност на Molecular Diagnostics, възможните източници на грешки

При извършване на пренатална диагностика от молекулярни методи Важно е да се има предвид двата основни източника на грешка:
- замърсяване проба фетални майчините клетки;
- възможност за пресичане над когато се използва косвения метод.

Като се има предвид много висока чувствителността на метода PCR, Важно е да се избегне замърсяване на пробите от плода тъкани на майка клетката. Чистотата на пробата за анализ може BP постигнато само чрез внимателен подбор на плацентата хорион въси или под бинокулярна лупа, последвано от промиване с физиологичен разтвор. Особено важно е да се предотврати майката контакт кръв в случай на вземане на проби фетален кръв от пъпна връв от cordocentesis. Висока квалификация на лекар-оператор и използването на качествени реакции за идентифициране на кръвоносните примеси се избегне това усложнение. Рискът от тези диагностични грешки може значително т.к. umenshen когато се работи при стерилни условия.

Надеждност на молекулярна диагностика от директния метод, т.е. чрез идентифициране на мутации в гена е много висока и се приближава абсолютно. Въпреки това, това цялото разнообразие от възможни промени в генома по време на узряването на гамети (пресичане-повече), и по-ранните етапи на ембриогенеза (мутагенен ефект) е по-точна диагностика индекс от около 99.9%. Значително по-трудно да се направи оценка на резултатите от молекулярна диагностика индиректен метод. В случай на регистрация на интрагенен полиморфизми точност непряк диагноза е доста висока, тъй като количеството vnutritennogo кросоувър обикновено не повече от 0.1% за повечето от известните гени.

Изключение може да бъде само относително големи гени, като гена на дистрофин, хемофилия А, неврофиброматоза, и др. По този начин, в случай на скорост дистрофин погрешна диагноза може да бъде до 2%, което съответства на превключващия vnutritennogo висока честота (около 2%) в този гигантски ген (2,2 милиона нд). Важно е също така да се вземе предвид степента на роднини и пробанта на пациента, който прекарва AP. Количеството на възможно увеличение на грешка, ако алел маркер не е определена в братя и сестри плодове, докато другите си роднини. Особено трябва да бъдат внимателно оценени резултати непряк диагноза използване vnegennyh полиморфна локуси. Смята се, че с увереност да прекарат AP в тези случаи може да бъде само едновременно тестване на няколко полиморфни места, съпътстващи мутиралия ген. Обикновено се използва за диагностични молекулни маркери, честотата на рекомбинация които мутант алели е по-малко от десети или стотни от процента. ДНК полиморфизми характерни последователности на праймери за PCR, косвени методи за стойности на грешката за различни заболявания диагностицирани пренатално са обобщени в прегледи и монографии.